ABI 7500 PCR仪具备多种功能，当然能够进行RT-PCR操作。这种仪器拥有先进的实时荧光定量PCR技术，支持逆转录实时荧光定量PCR（RT-qPCR），能够快速准确地检测RNA病毒或mRNA的表达水平。RT-PCR是一种结合了逆转录酶和聚合酶链式反应的技术，用于将RNA转化为互补DNA（cDNA），随后进行PCR扩增，从而实现定量分...
1 qPCR仪器工作原理 qPCR仪器是由荧光定量系统和计算机组成，主要包括这三个反应模块：激发光发射源，接收装置，PCR反应模板。在PCR反应模块中进行qPCR反应，当仪器的激发光发射源发出一定波长的光线，遇到qPCR反应体系中的荧光基团则会反射另外一个波长的光线，此时被接收装置实时接收，接收的数据传送至计算机，计算机...
2、灵敏度和可重复性 效率在90–110%的理想窗口内的标准曲线确定了RT-qPCR反应可测量的起始模板量范围。某种程度上可通过靶点Ct在扩增曲线上出现的时间测定灵敏度。但是，分析灵敏度的实际测量方法是特定少量的模板是否适用于标准曲线并维持理想的扩增效率。符合要求的稀释度最高的样本决定了反应灵敏度。标准曲线还包括...
重复标准曲线以评估一致性,从而保持样本的数据准确度。 四、RT-qPCR四方面常见困难 RT-qPCR的常见困难可归结为四个主要方面:引物二聚体的形成、引物和探针的储存、实时荧光定量 PCR的抑制和较低的反应效率、软件分析设置。 图6:实时荧光定量PCR常见四方面困难 RT-qPCR反应应用: 1、感染性疾病检测 2、肿瘤基因检测...
其次,在通过判断qPCR仪器(不同仪器有的需要ROX染料、Low ROX染料、High ROX染料进行校正,有的不需要),选择合适的qPCR试剂。最后,进行实验验证qPCR产品的的扩增效率、扩增曲线、灵敏性、特异性、稳定性等性能。这样才能很好挑到合适又实用的qPCR产品,同时最主要的还是考虑性价比,毕竟做科研真的很耗经费。小编通过实践...
RT-qPCR反应所使用的荧光化学可分为两种:荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下: 1、TaqMan荧光探针 PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。 图3...
对于RT-PCR来说,它不仅仅只是逆转RNA,更对后续qPCR或其他实验的结果有着至关重要的作用,我们需要注意以下几点: 1.提取RNA后并检测其质量 对RNA质量的检测包含RNA完整度测定及RNA产量测定两部分: (1)RNA的完整度对cDNA的合成结果会产生重要的影响。 通过琼脂糖凝胶电泳进行检测是方法之一,这也是一般实验室最常用的...
我用试剂盒提取的但是测的时候浓度好低但是我跑胶检测的时候还可以啊测的最低的只有37.7ng/ul,就是看不清楚的那个(也有可能是曝光问题)不知道可不可以做RT啊~1f/10/537062_1314716691_506.jpg33/b3/537062_1314716692_958.jpg