在进行RT qPCR实验时,要获得理想的扩增曲线,需从引物设计和异常结果分析两方面入手。首先,引物设计需跨越外显子连接,确保特异性,并通过BLAST检测验证。引物长度应适中,GC含量需平衡,且3′端避免选择A,以防假阳性。同时,引物应避免自身及相互间的互补序列,减少二级结构干扰。PCR产物长度也需控制在合适范围内。其次,...
RT qPCR实验怎么做出理想曲线 04月30日 常见问题解析: 1. 引物设计技巧 1)引物最好应设计成跨越一个外显子-外显子连接,其中一条扩增引物可以潜在地跨越实际外显子-内含子边界。这种设计可以减少从污染的基因组DNA中扩增到假阳性的风险。 2)引物应具有特异性。引物设计完成以后,应对其进行...
这个没办法只能重新做了
RT qPCR实验怎么做出理想曲线 04月30日 常见问题解析: 1. 引物设计技巧 1)引物最好应设计成跨越一个外显子-外显子连接,其中一条扩增引物可以潜在地跨越实际外显子-内含子边界。这种设计可以减少从污染的基因组DNA中扩增到假阳性的风险。 2)引物应具有特异性。引物设计完成以后,应对其进行BLAST...