可以证明两个蛋白有直接的相互作用。该实验是体外实验,可能无法完全反映体内条件下的蛋白互作情况,可结合Co-IP技术进行检测。 ❖实验步骤 1、GST标签蛋白表达和纯化; 2、GST标签蛋白偶联GSH琼脂糖珠或者磁珠; 3、和细胞裂解液或者另一个蛋白共同孵育; 4、清洗和洗脱:清洗掉非结合蛋白,洗脱目标蛋白; 5、蛋白检测...
近年来,研究分子相互作用的技术不断出现。 分子互作研究方法简介 传统研究分子互作的方法有很多,对于涉及蛋白质相互作用的研究方法有:酵母双杂交、酶联免疫吸附分析(ELISA)、荧光共振能量转移(FRET)、免疫共沉淀(CO-IP)、免疫印迹(western blot)、质谱技术(Mass Spectrometry);对于涉及核酸相互作用的研究方法有EMSA...
总结：从这个案例中我们可以了解到，在寻找一个蛋白的未知互作蛋白时，大家除了想到酵母双杂筛库的实验之外，IP-MS也是我们应该想到的方法。相比与酵母双杂筛库，IP-MS筛选的是天然状态下的蛋白互作，在一定程度上更能反应生物体内的真实情况，并且不用担心诱饵蛋白会存在自激活作用。因此，以后在研究一个未知蛋白的互...
随后观察IP（α-GFP）组，阴性对照组为利用GFP标签抗体磁珠对GFP标签空载体和Protein B-FLAG混合表达的裂解液进行免疫沉淀，结果只显示检测到GFP标签空载体的条带，说明GFP标签空载体和Protein B-FLAG没有发生互作，证明了互作的特异性。另一组则是利用GFP标签抗体磁珠对Protein A-GFP和Protein B-FLAG混合表达的裂解...
蛋白质是生物功能最直接的执行者,虽然一些蛋白质可以独立的完成他的使命,但是大部分的蛋白都是需要一些伴侣分子的协助一起完成任务或者形成复合物之后才能充分发挥他的功能。所以,了解蛋白质与蛋白质之间的相互作用,能够帮助我们更好的了解细胞的生命活性,揭示...
教程链接:《分享一个基因蛋白互作数据库》 5. HINT HINT中的数据来自8个互作资源数据库(BioGRID、MINT、iRefWeb、DIP、IntAct、HPRD、MIPS和PDB),支持进行单个或批量查询。最近的更新在2021(稍微有点旧了),可酌情参考使用。 以SH3GL2为例,在首页过滤器中完成选择并Submit,在跳转页面稍等片刻,可获得该蛋白的PPI...
基因互作是指非等位基因之间通过相互作用影响同一性状表现的现象。主要表现为重叠、互补、抑制、积加、显性上位和隐性上位等6种情况。 一、基因互作就像夫妻打扫房间卫生一样 丈夫在家就为A_(丈夫可能是纯合体,也可能是杂合体),不在就为aa; 妻子在家就为B_(妻子可能是纯合体,也可能是杂合...
在拿到下机数据进行生信分析时，我们往往会筛选差异基因后进行蛋白互作分析，以及差异基因富集分析去寻找感兴趣的通路等。这里给大家介绍一款开源网络可视化和分析的工具：Cytoscape。本文将实际操作Cytoscape绘制ppi互作网络的过程，以及ClueGO和CluePedia插件富集分析，帮助大家熟悉Cytoscape软件的操作。手把手带你学会如何绘制如...
分子间互作实验的类型 根据作用的分子类型(DNA、RNA和蛋白),可以将分子间互作分为以下: ①蛋白质-蛋白质:如免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(CO-IP)、GST pull-down、Far-Western Blotting ②蛋白质-RNA:如RIP、RNA pull down ③蛋白质-DNA:如染色质免疫共沉淀技术(ChIP) ...
蛋白与DNA之间的互作,目前所采用的主要研究方法如下: 1、ChIP:采用甲醛交联(有些强亲和力的蛋白例如H3组蛋白等可不交联),而后蛋白抗体拉取蛋白-DNA复合物,而后通过检测DNA的一种验证蛋白与DNA的作用。 该法优点:生理条件下直接的结合作用,不受结合能力强弱的影响。缺点:ChIP 实验的抗体要求较高。