1.除了这些湿实验方法以外,还有干实验的方法策略:像AlphaFold、分子对接等也能让蛋白-蛋白互作结果更可信,因此一般也需要; 2.在这些技术中,有的技术适合筛选靶蛋白(如酵母双杂交Y2H),有的技术适合验证蛋白互作(如邻近连接技术PLA),也有的技术既适合筛选靶蛋白,也适合验证蛋白-蛋白互作(如免疫共沉淀Co-IP+蛋白质谱...
Co-IP反映的是两个蛋白在体内或细胞水平的相互作用,因为在进行CoIP检测时,样本一般源于非变性裂解细胞,活细胞状态下蛋白质之间的相互作用被保持,所以其反映的是细胞中真实的蛋白互作情况,但是诱饵蛋白和靶标蛋白之间是直接作用还是有其它蛋白介导的间接相互作用无法确定。 在实验难度上,因为固相复合物组分多,需要非变性...
1.原理：基于基因表达的调控机制，将两个蛋白分别与目标基因和报告基因融合，通过检测报告基因的表达来判断两个蛋白是否相互作用。2.应用：广泛用于大规模筛选蛋白质相互作用，尤其适用于基因组范围内的PPI研究。二、免疫共沉淀（Co-IP）：1.原理：利用抗原与抗体之间的特异性结合，将目标蛋白及其互作蛋白一起沉淀下来。
这些技术作为如今的研究中的常客，其中IP-MS是常用的在植物体内筛选互作蛋白的有效方法，Co-IP则常用于筛选后的蛋白之间的点对点验证，ChIP是用来研究蛋白质与DNA是否在体内存在相互作用，常用来检测转录因子结合位点，RIP用来研究细胞内RNA与蛋白质结合的技术，今天小源将选择IP-MS和Co-IP这两种技术，从原理、实验步骤...
通过报告基因表达与否，即可判断两蛋白之间是否存在相互作用。通常在现实情况中，与蛋白X存在潜在互作可能的候选蛋白会有好几种（Y，Z，A，B等），这时我们就可以通过酵母双杂交在体内筛选与X有相互作用的蛋白Y。遇见爱情——Co-IP：竟然我们在体内验证过，那么蛋白X和蛋白Y在体外是否也存在相互作用了？这个时候我们...
因此了解与研究蛋白质间的相互作用，是理解细胞内发生若干生物化学活动的第一步。在植物中研究蛋白互作时，大家常用的方法有：双分子荧光互补实验（BiFC）、荧光素酶互补实验（LCA）以及免疫共沉淀（Co-IP）等，那么除了这些常用的技术之外，还有其它的蛋白互作研究方法吗？答案当然是肯定的！在本期的推文中，小远就...
Pull-down是通过磁珠/琼脂糖填料固定带有标记的“诱饵”蛋白,从细胞裂解液、纯化蛋白或表达系统中捕获“猎物”蛋白,然后将复合物蛋白分离后进行凝胶或质谱分析,从而确认互作蛋白的“身份”。Pull-down较Co-IP的优点在于,不仅能证实靶蛋白的直接相互作用,且洗脱条件也很...
蛋白互作在细胞生命活动中起着至关重要的作用，并在不同的时空层面上参与多种细胞活动，因此研究蛋白互作对于理解分子调控网络至关重要。而在植物中筛选到潜在的互作蛋白后，大多数情况下，获得表达两种蛋白的稳定转化植株费时又费力。在这种情况下，如果不需要非常严格地在植物体内研究两个蛋白的互作的话，大家可以考虑...
蛋白质互作网络(PPI, Protein-Protein Interaction Networks)是由蛋白通过彼此之间的相互作用构成,来参与生物信号传递、基因表达调节、能量和物质代谢及细胞周期调控等生命过程的各个环节。系统分析大量蛋白在生物系统中的相互作用关系,对了解生物系统中蛋白质的工作原理,了解疾病等特殊生理...
疏水相互作用则促使蛋白质折叠和稳定构象。这些物理化学相互作用为蛋白质之间的互作提供了基础。二、分子识别机制分子识别是蛋白质之间相互作用的另一种重要机制。它涉及到两个或多个蛋白质在空间上精确匹配，形成高度特异性的相互作用。分子识别主要依赖于蛋白质表面的特定氨基酸残基，这些残基通过氢键、静电相互作用或范...