首先，最常见的问题是时机不当，即在胶尚未完全凝固之前就急于拔出梳子。这种情况下，由于胶的流动性，很容易导致胶柱残缺不全或上样孔变形。其次，梳子与玻璃板的不匹配也可能成为问题，例如梳子与玻璃板之间存在间隙或插入时过于紧密，都可能影响拔梳子的结果。此外，拔梳子的方式不正确也是一个潜在原因，包括用力...
正确的拔梳子方式应该是双手在梳子两边均匀用力，动作缓慢轻柔，边拔边看，保证梳子水平地拔出。
WB实验拔梳子后胶歪了如何补救? #sci实验 #实验发文 #科研 #westernblot #实验日常 - SCI 科研助手于20241001发布在抖音,已经收获了9.2万个喜欢,来抖音,记录美好生活!
分为两种情况,一种是胶底部出现气泡,原因可能是由于胶垫材质或梳子插入不当所致,可考虑改用实心软胶垫或添加保鲜膜。另一种情况是梳子下缘出现气泡,解决方法是先插一侧梳子再插另一侧。 4、拔梳子后泳道有胶丝 原因:TEMED用量过多导致胶凝固过快。 解决方法:减少TEMED用量。 5、拔梳子后泳道歪斜 原因:梳子与玻璃...
（2）灌注浓缩胶方法与灌注分离胶相同，注意避免产生气泡。将玻璃板剩余空间灌满浓缩胶后垂直插入梳子。待浓缩胶凝固后，将梳子垂直拔出。（3）检测蛋白浓度，计算上样量。加入足够电泳液后（至少漫过内侧的小玻璃板）将上样样品与上样缓冲液按体积比4:1混合煮沸5min，缓慢加入加样孔，避免样品溢出加样孔。注意...
图1.Western blot实验流程图 2.1 蛋白质的提取 成功提取出高质量的蛋白，WB实验便成功了一半。接下来，我们先看看蛋白质如何提取。由于质粒或者病毒载体携带的外源基因转染细胞后36-48小时左右达到表达高峰，因此建议在这个时间收集并裂解细胞。具体步骤如下：① 裂解细胞：裂解过程中一般会用到RIPA裂解液（其原理是...
③迅速拔出梳子,用枪轻轻吹孔使碎片冲出 ④依次加入蛋白marker和蛋白样品,每孔加上样液20ug,留一孔加预染的marker.加满电泳缓冲液,盖上槽盖,接通电源,先用70V恒压电泳,约30min,当指示剂溴酚蓝进入分离胶后改用90V恒压电泳,当指示剂到达距凝胶下端约0.5cm处时关闭电源,取出胶板。(上样时间尽量短,避免样品扩...
插梳子:浓缩胶液灌进去后插梳子。 5.拔梳子:积层胶凝固后不要急着拔梳子,而是应该把玻璃板-胶-梳子这一套作为一个整体拆下来,装进电泳槽,倒好电泳液后再拔。 样品准备 1.蛋白+1xloading buffer混合后金属浴100℃ 10 min,用重物压着装有蛋白的EP管,以防管盖被冲开。
蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)是将蛋白质经电泳分离后转移到膜上,然后利用抗体进行检测的技术。完整的WB流程,如下图所示,包含样本制备、SDS-PAGE、转膜、抗体结合、蛋白检测等5个大步骤。 样品制备 1、蛋白提取 1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。