WB实验拔梳子后胶歪了如何补救? #sci实验 #实验发文 #科研 #westernblot #实验日常 - SCI 科研助手于20241001发布在抖音,已经收获了9.2万个喜欢,来抖音,记录美好生活!
分为两种情况,一种是胶底部出现气泡,原因可能是由于胶垫材质或梳子插入不当所致,可考虑改用实心软胶垫或添加保鲜膜。另一种情况是梳子下缘出现气泡,解决方法是先插一侧梳子再插另一侧。 4、拔梳子后泳道有胶丝 原因:TEMED用量过多导致胶凝固过快。 解决方法:减少TEMED用量。 5、拔梳子后泳道歪斜 原因:梳子与玻璃...
（2）灌注浓缩胶方法与灌注分离胶相同，注意避免产生气泡。将玻璃板剩余空间灌满浓缩胶后垂直插入梳子。待浓缩胶凝固后，将梳子垂直拔出。（3）检测蛋白浓度，计算上样量。加入足够电泳液后（至少漫过内侧的小玻璃板）将上样样品与上样缓冲液按体积比4:1混合煮沸5min，缓慢加入加样孔，避免样品溢出加样孔。注意...
正确的拔梳子方式应该是双手在梳子两边均匀用力，动作缓慢轻柔，边拔边看，保证梳子水平地拔出。
原因:梳子与玻璃板不匹配。 解决方法:在灌胶前先测试梳子是否与玻璃板匹配。 二、电泳阶段 注意事项 1、确保上样体积一致,以免蛋白条带出现不同水平。空置的加样孔需添加相等体积的1×loading buffer,避免相邻通道蛋白样品扩散。在上样过程中,缓慢添加样品,避免快速吹打导致溢出,且上样体积应小于上样孔的总容积。
图1.Western blot实验流程图 2.1 蛋白质的提取 成功提取出高质量的蛋白，WB实验便成功了一半。接下来，我们先看看蛋白质如何提取。由于质粒或者病毒载体携带的外源基因转染细胞后36-48小时左右达到表达高峰，因此建议在这个时间收集并裂解细胞。具体步骤如下：① 裂解细胞：裂解过程中一般会用到RIPA裂解液（其原理是...
Western blot的作用 (一)确定目的蛋白的表达情况 这是Western blot最常规的应用,如检测患者的标本与正常人的标本、实验条件处理后细胞与未处理的对照细胞之间目的蛋白的表达变化情况,通过灰度分析可以确定目的蛋白表达水平是升高还是降低。 (二)研究蛋白间的相互作用 ...
最后放一张图片大家看看,这是我认为的配的比较好的胶,梳子下无气泡,分界处呈现一条笔直的折光线,各处均质透明。 汇总了各类 western 转膜条件 实验技术交流心得-western blot 胎鼠神经干细胞免疫荧光鉴定步骤 霉菌和酵母菌检验方法 用于酵母繁殖和筛选...
插梳子:浓缩胶液灌进去后插梳子。 5.拔梳子:积层胶凝固后不要急着拔梳子,而是应该把玻璃板-胶-梳子这一套作为一个整体拆下来,装进电泳槽,倒好电泳液后再拔。 样品准备 1.蛋白+1xloading buffer混合后金属浴100℃ 10 min,用重物压着装有蛋白的EP管,以防管盖被冲开。