成功完成Western Blot检测,必须满足4个条件: 1.凝胶洗脱:转移期间蛋白质必须从凝胶中洗脱出来,如果蛋白质还截留在凝胶中,将无法在膜上进行分析2.吸附到膜上:在转移过程中蛋白质必须吸附到膜上,如果蛋白不吸附,将无法在膜上进行分析3.处理期间仍截留在膜上:在转移后的处理过程中蛋白质必须保持吸附在印迹膜上4.处...
可用BIO-RAD Trans-Blot Turbo 5x Transfer Buffer (1份 20ml) + ethanol (1份 20ml) + nanopure water (3份 60ml) (需预冷) 2A~2.5A,恒压25V,10min(可根据需要改变条件)BIO-RAD仪器。 2.4 封闭和敷一抗 将PVDF膜放入封闭液(1% milk in 1x TBST 含 0.1% Tween 20;或者3% BSA in 1x TBST 含...
Western blot素来就是个老生常谈的实验,饶是如此,新手们仍是深觉此坑易入不易出,但老司机却已经达到坐看云起时的淡然境界,原因无他,多番的千锤百炼早已练就了金刚不坏之身,深谙WB实验的他们对其流程中的任一细节都了如指掌。 现如今就将这素不外传的操作秘籍分享给大家,让大家可愉快与WB实验玩耍。
Our standard Western blot protocol, including RIPA and SDS sample buffer recipes. Download PDF version Western blot is an analytical technique used to detect and determine the abundance of specific proteins of interest within a sample. This sample is usually called a lysate, which is the product ...
WesternBlot原理、protocol洗膜时间可以稍微长一点一抗和二抗的比例需要参考说明书保存和回收条件也是一抗是什么动物来源的二抗就是抗一抗动物的抗体比如说一抗是来源于rabbit二抗就是antirabbit WesternBlot原理、protocol 一、组织、细胞总蛋白抽提:参考相关裂解液; 二、蛋白浓度测定:BCA法,这个结果要参考说明书!
三、Western blot步骤: (一)、玻板的清洗: 自来水→75%酒精擦拭→ddH2O→竖放晾干/吹干(做胶的一面朝内)【勿用手指触摸玻板内侧面】装板: 低的一面向内,确认玻板底部平齐,插入斜楔板压实卡紧,加ddH2O不漏,滤纸吸干水; (二)、配胶(1.0mm): 分离胶 5% 浓缩胶, 3 ml/块胶 ...
WesternBlotprotocol实验步骤 WesternBlotprotocol实验步骤 Western Blot protocol 主要试剂及缓冲液的配制 1). 30%丙烯酰胺：将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为100ml的⽔中。搅拌器帮助溶解，滤纸过滤除杂质，避光保存于4度冰箱。2). 10% SDS：称量10g⼗⼆烷基硫酸钠，加⼊80ml超纯⽔...
Western blot protocol1.绘制BSA标准曲线(目的:测蛋白浓度) 1.方法:BCA法(生工) 2.需要配的试剂:1× PBS溶液 10× PBS溶液: Na2HPO48 mM NaCl 136mM KH2PO42mM KCl 2.6mM 3.注意: ①用分光光度计测定A562吸光值时,所需样品最小体积为1ml,即,加样体积为:1× PBS—0.5ml,BCA工作液—0.5ml; ②...
Western_Blot_protocol Western Blot Protocol (一)取材 当天提蛋白，来自cell culture中的传代cell line。1.取种有细胞的六孔板，真空吸去培养液，PBS洗3遍。2.加入裂解液，裂解液配方：1份PI（蛋白质抑制剂，10×原液加PBS稀释至 1×），1份TritonX-100（10×原液加PBS稀释至1×），8份PBS。3.用刮刀把...
Western Blot protocol SDS-PAGE:SDS-PolyAcrylamide Gel Electrophoresis 【原理】 Western Blot又称免疫印迹,是指将蛋白样品转移到固相载体上,而后利用相应的抗体来检测目的蛋白的一种方法。是检测混合样品中单一特定蛋白的常用技术。 Western Blot间接法基本原理:首先利用SDS-PAGE对蛋白质样品进行分离,然后转移到固相载体...