吸显影液滴在膜上,确保显影液浸润到了膜所有地方;3、image Lab曝光步骤:膜放置皿中(小口径玻璃皿中)—打开仪器(image lab),膜放入机器—选择印迹—colorimetic—自动曝光—拍白光圈4、曝光拍照(CHEMI)—选择“放置凝胶”——设置曝光时间(自动or手动)—凝胶成像—保存注意:一抗原液(1:1000)稀释,若显影条带...
(2) 倾斜垂直槽制胶架子装入垂直槽制胶固定架,注意为防止胶片变形漏液体,不要过分用力下压,并确保卡好。(3) 按照每块 5 mL 配制分离胶(1 mm 厚度),轻轻混匀后立即铺板;(SDS-PAGE 凝胶配方详见“怎么做 Western blot? 看这一篇就够了!”)(4) 铺板后用异丙醇将分离胶液面压平;(5) 凝固 40 min 后,...
蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)是将蛋白质经电泳分离后转移到膜上,然后利用抗体进行检测的技术。完整的WB流程,如下图所示,包含样本制备、SDS-PAGE、转膜、抗体结合、蛋白检测等5个大步骤。 样品制备 1、蛋白提取 1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。
WesternBlot检测标准流程 Western Blot检测 SOP 1目的为了使抗体部生产活动正常进行,特制定本规程。 2 范围适用于Western Blot检测工作人员的生产活动。 3 责任生产部门组织制定和实施,行政部负责监督。 4 程序 4.1 WB检测原理 蛋白质印迹(Western blot),是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。WB...
6. 蛋白质免疫检测 1) 将 PVDF 膜放入封闭液中(含 5 %脱脂牛奶的 TBST),室温封闭 2 h; 2) 将 PVDF 膜用 TBST 简单冲洗后放入用封闭液稀释的一抗中,4 ℃轻摇过夜; 3) 将 PVDF 膜从稀释过的一抗中取出,用 TBST 洗膜 3×15 min; 4) 将 PV...
1.准备一张适合大小的聚偏二氟乙烯膜(PVDF)以及滤纸6片。将胶浸泡于转移缓冲液中10min(如检测小分子蛋白,即可免去这一步骤,因小分子蛋白容易扩散出胶)。 2.在使用PVDF膜之前需进行活化:PVDF膜需在纯甲醇中浸泡3-5s,再于盆里加入转移缓冲液,并把转膜用的架子、玻璃棒、滤纸、两块海绵和经过甲醇活化的PVDF活化...
(1)根据wb检测试剂盒说明书,配制显影液。 (2)将孵育完成的膜用镊子将其平铺在平板上,移液枪吸取发光底物,均匀覆盖膜。 (3)将平板放入显影仪。 wb检测 化学发光 wb检测 化学发光 最后就是进行整个western blot(蛋白质免疫印迹)实验结果的拍照与总结分析啦,回顾整个实验过程,详细步骤其实就是:提取细胞蛋白、BCA定...
Western Blot 实验步骤 组织(小鼠十二指肠)蛋白提取 1. 准备: 研磨珠、离心管、生理盐水、RIPA蛋白裂解液、蛋白酶抑制剂,磷酸化蛋白酶抑制剂,移液枪,枪头,手套,冰,涡旋仪,4℃离心机; 在RIPA蛋白裂解液中加入蛋白酶抑制剂、磷酸化蛋白酶抑制剂(根据说明书确定加入量)...
WB实验操作流程 一、蛋白质的样品制备 这一步方法各异,具体步骤请参考试剂盒的说明书即可。蛋白质的样品制备是Western Blot的第一步,样品制备是关键步骤,要求尽可能的获得所有蛋白质,应注意以下问题: > 在合适的盐浓度下,应保持蛋白质的最大溶解性和可重复性。
步骤: 一、试剂准备 二、蛋白样品制备 三、蛋白含量的测定 四、SDS - PAGE电泳 五、转膜 六、免疫反应 七、化学发光,显影,定影 八、凝胶图象分析 实验准备 实验材料:蛋白质样品。 试剂、试剂盒:裂解液 PBS G 250考马斯亮蓝溶液 NaCl SDS上样缓冲液 电泳缓冲液 转移缓冲液 丽春红染液 封闭液 TBST TBS 洗脱...