蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)是将蛋白质经电泳分离后转移到膜上,然后利用抗体进行检测的技术。完整的WB流程,如下图所示,包含样本制备、SDS-PAGE、转膜、抗体结合、蛋白检测等5个大步骤。 样品制备 1、蛋白提取 1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。
整体顺序为“黑色电极—海绵—3层滤纸—凝胶—PVDF膜—3层滤纸—海绵—红色电极”。将夹子放入转移槽槽中，要使夹的黑面对槽的黑面，夹的白面对槽的红面。电转移时会产热，在槽的一边放一块冰来降温。一般用60 V转移2 h或40 V转移3 h（可能会有比较大差别，我们实验室一般200 mA（约70 V）转膜15 min就...
1. 样品准备：蛋白质提取：从细胞或组织中提取蛋白质，通常使用含有去污剂和蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液。蛋白质定量：使用Bradford法、BCA法或Lowry法等对提取的蛋白质进行定量。2. 蛋白质电泳：制备SDS-PAGE凝胶：根据蛋白质的分子量选择合适的凝胶浓度。加样：将蛋白质样品与上样缓冲液混合后，上样至凝胶中。电泳...
2. 将一抗用TBST稀释至适当浓度(在1.5 ml离心管中);撕下适当大小的一块儿保鲜膜铺于实验台面上，四角用水浸湿以使保鲜膜保持平整;将抗体溶液加到保鲜膜上;从封闭液中取出膜，用滤纸吸去残留液后，将膜蛋白面朝下放于抗体液面上，掀动膜四角以赶出残留气泡;室温下孵育1～2 h后，用TBST在室温下脱色摇床...
WB实验流程|超详细实验步骤,小白教程蛋白免疫印迹(Western Blotting)是将电泳分离后的蛋白质从凝胶转移到NC膜或PVDF膜上,然后用特异性抗体检测某特定蛋白的一种蛋白质检测技术。 #医学生#硕博#SCI#研究生的日常 # - 科研ICE于20240611发布在抖音,已经收获了31个喜欢
WB常规实验流程 步骤: 一、试剂准备 二、蛋白样品制备 三、蛋白含量的测定 四、SDS - PAGE电泳 五、转膜 六、免疫反应 七、化学发光,显影,定影 八、凝胶图象分析 实验准备 实验材料:蛋白质样品。 试剂、试剂盒:裂解液 PBS G 250考马斯亮蓝溶液 NaCl SDS上样缓冲液 电泳缓冲液 转移缓冲液 丽春红染液 封闭液...
蛋白质印迹法（Western Blotting）的6个基础步骤：1.样品制备2.通过凝胶电泳分离蛋白质 3.蛋白质转移（电印迹）到膜上 4.膜封闭 5.免疫检测6.靶蛋白显印 WB法可用于检测天然和合成来源的蛋白质。来自表达系统的重组蛋白和来自生物样品的内源蛋白都可以用蛋白质印迹法检测。对于要通过WB分析的蛋白质，首先必须要...
wb蛋白免疫印迹实验步骤 wb蛋白免疫印迹实验,这可是个相当有趣的过程呢!就好像一场精心编排的舞蹈,每一个步骤都得恰到好处。 首先,得准备好咱们的“舞台”,也就是电泳槽啦。把蛋白样品小心翼翼地加到凝胶孔里,这就像是让演员们各就各位。然后通上电,看着那些蛋白分子们在电场的作用下欢快地奔跑,哎呀,真有意思...
蛋白质免疫印迹(Western Blot|WB )实验方法原理步骤及注意事项 一:蛋白提取 1、组织蛋白提取 1)所需器材:制冰机、标记笔、两套1.5ml EP管(最好高温高压处理)、一个大冰盒、一个1.5ml EP管盒、手套、眼科剪(最好高温高压处理)、新鲜组...