蛋白免疫印迹(Western Blot,简称WB)是一种能够从细胞或组织提取的复杂蛋白质混合物中检测靶蛋白并对其进行半定量的常用实验技术,还可以鉴定和定量蛋白质中翻译后修饰的氨基酸。与蛋白质科学中其他常用的分析技术(如ELISA、IHC、质谱法和显微镜观察等)相比,WB可提供有关蛋白质分子量信息,区分分子量相近的蛋白,适合检测...
低丰度蛋白可能需要浓缩,以便于western blot检测。纯化标记(如HIS6标记)允许使用亲和柱(如镍)浓缩蛋白质。确保洗脱缓冲液与加载缓冲液兼容是很重要的。另外,如果有针对特定蛋白质的抗体,可以使用免疫沉淀等方法有效地浓缩蛋白质。蛋白质浓缩大型蛋白质制备通常需要在纯化步骤中进行浓缩步骤,以将材料体积减少到...
Western Blot 1 一、所需试剂... 2 1、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒... 2 2、电泳液(可回收使用2次):配方见 三... 2 3、电转液:配方见 三... 2 4、TBST(4℃避光保存):配方见 三... 2 5、4X Laemmli样品缓冲液(-20℃保存)... 2 6、10-180kda 蛋白marker(-20℃保存1年,4℃ 3个月)... 2...
蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB ) 蛋白质免疫印迹可应用于:(1)从蛋白质混合物中检出目标蛋白质;(2)定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况;(3)用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。 底物化学发光ECL法 1.实验方法原理 Western免疫印迹,是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测...
蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)是将蛋白质经电泳分离后转移到膜上,然后利用抗体进行检测的技术。完整的WB流程,如下图所示,包含样本制备、SDS-PAGE、转膜、抗体结合、蛋白检测等5个大步骤。 实验步骤 1. 样本制备 1)融解RIPA裂解液(RIPA裂解液-细胞/组织裂解液缓冲液),混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内...
免疫印迹,又被称为蛋白质印迹(Western blot,WB),是一种复合性的免疫学检测技术。该方法通过利用SDS-PAGE技术,在生物样本中将蛋白质分子根据其分子量在凝胶上进行分离,随后通过电转移的方式将这些蛋白质转移到固相膜上。固相膜上的蛋白质充当抗原,与相应的抗体发生免疫反应,接着与酶标记的第二抗体发生反应。...
蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB ) 标签: western-blot 免疫印迹 蛋白质 蛋白质免疫印迹可应用于:(1)从蛋白质混合物中检出目标蛋白质;(2)定量或定性确 定细胞或组织中蛋白质的表达情况;(3)用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质RNA相互作用后续分析。 实验材料 蛋白质样品 试剂、试剂盒 裂解液 PBS SDS上...
免疫印迹,又被称为蛋白质印迹(Western blot,WB),是一种复合性的免疫学检测技术。该方法通过利用SDS-PAGE技术,在生物样本中将蛋白质分子根据其分子量在凝胶上进行分离,随后通过电转移的方式将这些蛋白质转移到固相膜上。固相膜上的蛋白质充当抗原,与相应的抗体发生免疫反应,接着与酶标记的第二抗体发生反应。最终,通...
蛋白免疫印迹(Western Blot)Buffer的准备 1)准备甲醇和ddH2O;2)配制1× PBST:500 mL 1× PBS+0.25 mL tween 20;3)配制5%的BSA封闭液:2.5 g的BSA溶解到50 mL 1x PBST中;4)配制一抗,二抗:用5%的BSA封闭液按说明书推荐比例稀释(一般新买的培养基可以进一步稀释使用);5)10× running buffer...
1) 显色步骤:配制DAB显色液,将膜放置于DAB显色液中,待条带显色清晰后,取出膜,自来水冲洗终止显色即可。 2) 分享一个经过验证、好用的DAB配方(也可在试剂公司购买现成的DAB显色液) Western DAB显色液配方:1M Tris-HCl(PH8.0) 200μL 5mg DAB 水9.8mL 用前加H2O2(30%)3.5μL...