与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或...
实验材料 蛋白质样品 试剂、试剂盒 裂解液PBSSDS上样缓冲液电泳缓冲液转移缓冲液丽春红染液TBSTTBS洗脱抗体缓冲液抗体 仪器、耗材 电泳仪移液器脱色摇床显影仪 实验步骤 一、实验步骤 ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ...
蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB ) 标签: western-blot 免疫印迹 蛋白质 蛋白质免疫印迹可应用于:(1)从蛋白质混合物中检出目标蛋白质;(2)定量或定性确 定细胞或组织中蛋白质的表达情况;(3)用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质RNA相互作用后续分析。 实验材料 蛋白质样品 试剂、试剂盒 裂解液 PBS SDS上...
Western Blot 1 一、所需试剂... 2 1、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒... 2 2、电泳液(可回收使用2次):配方见 三... 2 3、电转液:配方见 三... 2 4、TBST(4℃避光保存):配方见 三... 2 5、4X Laemmli样品缓冲液(-20℃保存)... 2 6、10-180kda 蛋白marker(-20℃保存1年,4℃ 3个月)... 2...
(2)取10ul上清(现用现离心),加入蛋白胶中,跑胶的样一般加在中间,若有多的胶孔,中间样品和marker之间可以加一个1x loading,防止marker或者样品交叉了。 (3)80V电压跑浓缩胶,一般20分钟左右;120V电压跑分离胶50分钟左右,跑完为止。 2.转膜 (1)预先半小时将转膜Buffer放置在冰里预冷(埋起来),然后用甲醇将PV...
简介:Western blot又称蛋白质免疫印迹实验,是分子生物学和免疫遗传学中广泛使用的分析技术,用于检测细胞分泌物或裂解物、组织匀浆或提取物样品中的特定蛋白质。实验的基础来源于物质分子量的不同(蛋白质电泳)和抗体特异性结合(ELISA)。实验步骤包括: ①实验...
最开始做印迹的是一个叫 Southern 的科学家,但印迹的对象是 DNA 链,他把这种技术称为 Southern blot,后来出现了两个过程相似,但是对象不同的印迹方法,一个针对 RNA,一个对蛋白质,人们分别把这两种技术的称为 Northern 和 Western。 实验原理 Western blot(也称为蛋白质免疫印迹)是一种常用于研究中分离和鉴定...
内参就是内部参照,一般是指管家基因编码表达的蛋白,它们在各个组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照参。内参则可以校正蛋白质定量、上样过程中存在的误差,保证实验结果的准确性。 此外,内参可以作为空白对照,还可以检测蛋白转膜情况是否完全、整个WB显色发光体系是否正常。内参抗体种类很...
Western blot(西方实验):蛋白质免疫印迹试验。 Southern blot(南方实验):检测DNA。 Northern blot(北方实验):检测RNA。 easternn blot(东方实验):用于检测蛋白质的翻译后修饰以及脂质和碳水化合物等成分的存在。 01 WB Western blot,就是WB,蛋白质免疫印迹试验,是对目的蛋白进行检测的一种实验方法,大致分为以下7步...
免疫印迹 (Immunoblotting) 又称蛋白质印迹 (Western blot,WB),是一种综合性的免疫学检测技术。它利用 SDS-PAGE 技术将生物样品中的蛋白质分子按分子量的大小在凝胶上分离开,然后用电转移的方法将蛋白转移到固相膜上,以固相膜上的蛋白质作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶标记的第二抗体起反应,经过底物显...