1,必须活细胞检测,不能用能破坏细胞膜完整性的固定剂和穿透剂固定或穿膜。2,特殊细胞的染色方法:在消化或吹打时,有些细胞(如神经元细胞)很容易受到损伤,导致晚期凋亡或坏死比例非常高,不能反映真实结果。实验的解决方法:先低速离心,吸取细胞培养板中的液体,留少许液体,加入适量PI和Annexin-V染色10min后,...
加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI); 5 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。 四、注意事项1Annexin V-FITC与PI量微,请在使用前低速离心将盖内壁上的液体甩...
Annexin V-FITC:在细胞凋亡的早期,PS从细胞膜内侧翻转到外侧。Annexin V是 一种与PS高亲和力结合的蛋白质,能够标记外翻的PS,从而检测早期凋亡细胞。 PI染色:PI是一种能够进入膜完整性已受损的细胞的染料。由于活细胞和早期凋亡 细胞的膜完整性较好,PI无法进入,因此这些细胞对PI是阴性的。 实验步骤 这里再简单复述...
细胞发生早期凋亡后,PS外翻到胞膜侧,Annexin V对PS有高度亲和力,用FITC标记Annexin V,PS外翻的细胞由于结合Annexin V-FITC发出绿色荧光。凋亡晚期,细胞膜结构受损,碘化丙啶(PI)透过细胞膜进入细胞,细胞同时发出红色荧光和绿色荧光。同时检测Annexin V-FITC(绿色荧光)和PI(红色荧光)的信号,对早期凋亡和晚期凋亡的细胞...
02 实验结果展示 图2:Annexin V-FITC/PI(E-CK-A211)实验结果展示 03实验中需要注意的细节 a. 样本制备方面:(1)贴壁细胞要尽量使用不含EDTA的胰酶进行消化。如果一定要用含EDTA的胰酶,终止消化后,要将细胞洗涤干净,尽量去除EDTA。(2)比较难消化的细胞、组织等样本,可以分批次消化,避免先消化下来的...
加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI); 5 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。 四、注意事项1Annexin V-FITC与PI量微,请在使用前低速离心将盖内壁上的液体甩...
图3. FITC和PI的发射光谱 调节方法:设置对照 空白管:诱导凋亡的细胞不加染料,用来调节荧光通道的光电倍增管电压; 单染管:分别需要只加PI和荧光标记的Annexin V两个单染管,用来调节2个荧光通道的补偿值; 荧光素之间的补偿值应保持恒定;双荧光染色时,如果一个荧光很强,而另一个很弱,则一定要做补偿;补偿只应用...
所以,通过Annexin V和PI双染的方法,就可以把早期凋亡的细胞与晚期凋亡加坏死的细胞区分开来。 Annexin V-FITC/PI法的实验步骤: 1,细胞按照实验方案进行凋亡诱导,300g离心5min,弃上清,收集细胞,PBS洗涤细胞一次,轻轻重悬细胞并计数。 2,取1-5×10^5重悬的细胞,300g离心5min,弃上清。用PBS洗涤细胞一次,离心后...
Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit 一、试剂盒说明 在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS )只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS )由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca 2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂...
艾美捷Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒注意事项:1.该试剂盒只能检测活细胞,而不能用于切片、擦刮、固定或浸润细胞样品的检测。2.细胞凋亡是一种持续变化的动态过程,选择合适的诱导时间对观察凋亡比较重要。染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加 3.如果有细菌或真菌污染,会严重...