Annexin V-FITC/PI法的原理： 正常细胞(活细胞)具有完好的细胞膜，此时细胞膜的组分之一——磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine，PS)位于细胞膜的内侧，当细胞发生凋亡时，细胞膜的结构发生改变，这使得原本在细胞膜内侧的PS外翻到细胞膜的表面，这种现象在凋亡的早期就会出现，因此就可以用与PS具有高亲和力、标记了荧...
加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI); 5 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。 四、注意事项1Annexin V-FITC与PI量微,请在使用前低速离心将盖内壁上的液体甩...
01实验原理 Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与磷脂酰丝氨酸（PS）高亲和力特异性结合。在细胞凋亡早期，只分布在正常细胞膜脂质双层内侧的磷脂酰丝氨酸（PS）翻向外侧，用标记了荧光素的Annexin V作为荧光探针，并搭配PI、7-AAD、DAPI等核酸染料使用，能够准确区分正常细胞、凋亡早期和...
因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一.将Annexin V进行荧光素(EGFP、FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生.碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红...
艾美捷Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒提供了一种简单有效的方法将不同凋亡时期的细胞有效区分开。凋亡早期细胞膜完整，表面暴露PS的细胞Annexin V-FITC染色呈阳性(绿色)，PI可以识别晚期凋亡和坏死细胞，这些细胞已失去质膜完整性，因此晚期凋亡和坏死细胞的细胞将被Annexin V-FITC和PI双重标记(绿色和红色...
1、Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。 2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。 (三) 获得含重组表达质粒的表达菌种 1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5...
艾美捷Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒注意事项：1.该试剂盒只能检测活细胞,而不能用于切片、擦刮、固定或浸润细胞样品的检测。2.细胞凋亡是一种持续变化的动态过程,选择合适的诱导时间对观察凋亡比较重要。染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加 3.如果有细菌或真菌污染,会严重...
1、Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。(三) 获得含重组表达质粒的表达菌种 1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α...
图1 Annexin V/PI检测原理。实验流程：（1）收集细胞：在进行完细胞凋亡刺激后，用预冷的PBS洗涤细胞2次，4℃离心5min，（贴壁细胞使用不含EDTA的胰酶消化）；（2）重悬细胞：取1～5×105个重悬的细胞，离心弃掉PBS，加入Annexin V-FITC结合液轻轻重悬；（3）染色：加入Annexin V-FITC和PI Staining Solution，...
将Annexin V进行荧光素(EGFP、FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不...