1.实验目的:THP-1慢病毒感染(CRISPR-Cas9体系,两步法)。第一步,LentiCas9慢病毒感染,让WT THP-1表达Cas9蛋白,通过Blasticidin(BSD)加压筛选;第二步,LentiGuide慢病毒感染,让THP-1(表达Cas9)表达sgRNA,通过Puromycin(Puro)加压筛选,从而得到目的基因敲除的THP-1 KO细胞株。
首先,THP1细胞是个密度依赖性很强的细胞系,低密度生长会抑制,高密度则会疯狂生长。所以,控制好密度非常重要。如果实验室条件允许,最好做个细胞计数来确定转染细胞的用量。一般来说,50-100万/ml是它的合适生长密度,但转染时建议取20万-30万/ml左右的密度。我试过很多次,即使没有做细胞计数,只要THP1细胞状态好,...
目的:通过构建慢病毒介导的CD86过表达THP-1细胞,探究CD86过表达THP-1巨噬细胞在马尔尼菲篮状菌(Talaromycesmarneffei,TM)感染中作用. 方法:1.构建慢病毒介导的CD86过表达THP-1细胞:设计目的基因CD86序列引物,PCR扩增制备目的基因片段与线性化载体进行重组反应,获得高纯度慢病毒LV-CD86载体质粒后转染HEK293T细胞进行病毒...