感染时可以用六孔板,取3个孔做三组感染,每个孔最终的液体量1-1.5ml即可。感染24h后将三个孔的液体收集到一个离心管里离心,用2ml15%血清的正常不含嘌呤霉素的培基重悬放置于六孔板的一个孔内继续培养3-5天,不要每天去动它。等培基变黄后移至T25瓶子里,加3ml新鲜不含嘌呤霉素的培基继续培养3-5天,等培基再...
1.实验目的:THP-1慢病毒感染(CRISPR-Cas9体系,两步法)。第一步,LentiCas9慢病毒感染,让WT THP-1表达Cas9蛋白,通过Blasticidin(BSD)加压筛选;第二步,LentiGuide慢病毒感染,让THP-1(表达Cas9)表达sgRNA,通过Puromycin(Puro)加压筛选,从而得到目的基因敲除的THP-1 KO细胞株。 2.实验结果:得到表达Cas9的THP-1工具株...
将重悬的细胞加入新的T25瓶子,补充4ml全培1640,同时额外补充前面讲的那个变黄的上清2ml(THP1喜欢酸性环境,取它原来的生长环境上清液有助于感染病毒之后的细胞活性变好,前提是这个变黄的培基不能有污染,确保没有支原体和病原体污染),将这7ml液体混匀,竖着放置培养瓶。 2-3天之后镜下观察细胞,可见细胞活力很好,虽...
1. FNDC5过表达慢病毒载体的构建PCR产物经测序验证，结果显示成功扩增并构建了FNDC5过表达慢病毒载体。载体在DH5α感受态细胞中扩增后，测序结果与预期一致，表明构建成功。2. 慢病毒颗粒的包装与滴度测定转染293T细胞后，可观察到绿色荧光表达，表明慢病毒颗粒成功包装。经测定，病毒滴度为1.32×10^9 TU/mL，满足...
THP-1作为悬浮细胞,瞬时转染效率低[35],本研究通过慢病毒感染策略,成功在THP-1细胞中构建了PSMB9-eGFP-His过表达稳转细胞系。免疫蛋白酶体亲和纯化实验证明,PSMB9-eGFP-His融合蛋白成功在免疫蛋白酶体中完成了组装,并替换了标准蛋白...
构建慢病毒表 达载体 pHR— L IL RB5, 与 p8. 91 和 pMD 共 同转入 293T 细胞 ,产生 标记有绿色荧光 的 L ILR B5 慢病毒 , 感染 单核细胞系 T HP一 1后 通过流式细胞 术检测 L IL RB5 的表达 。 示真核表达 载体 pE G FP— L ILR B5一 flag 的序列与预期相 符, 瞬时转染 pE GFP -L...
携带有绿色荧光蛋白的 LILRB5慢病毒感染单 核 细胞系 THP-1在荧光显微镜下检测 到绿色荧光。 流 式细胞术检测显示,经稳定传代的 THP-1细胞系 EG- FP 的表达持续显著增强,表明 pHR-LILRB5慢病毒 转染的 THP-1 细胞,稳定表达 LILRB5,持续传代不 会影 响 LILRB5 的表达水平,LILRB5 稳定转染的 THP-1细胞系...
本实验拟通过腺病毒,慢病毒,脂质体2000三种方法分别转染THP-1巨噬细胞,探讨转染THP-1巨噬细胞的最佳方法,为THP-1巨噬细胞相关感染实验提供基础。 材料和方法 一、主要材料与试剂 人THP-1细胞来源于南京军区南京总医院呼吸内科实验室;胰酶:碧云天公司;1640细胞培养基(维森特公司);OPTI培养基(美国Gibco公司);胎牛血...
目的:通过构建慢病毒介导的CD86过表达THP-1细胞,探究CD86过表达THP-1巨噬细胞在马尔尼菲篮状菌(Talaromycesmarneffei,TM)感染中作用. 方法:1.构建慢病毒介导的CD86过表达THP-1细胞:设计目的基因CD86序列引物,PCR扩增制备目的基因片段与线性化载体进行重组反应,获得高纯度慢病毒LV-CD86载体质粒后转染HEK293T细胞进行病毒...
摘要:分析下调BECN1对人白血病细胞系THP-1增殖、侵袭和迁移的影响,初步探讨其潜在的分子机制。方法 采用RNA干扰技术构建靶向BECN1表达特异性shRNA的慢病毒及阴性对照。将THP-1细胞分为对照组(control)、阴性对照组(NC)、BECN1干扰组(BECN1-shRNA)。分别采用对应慢病毒感染后,经嘌呤霉素筛选稳转的细胞株。RT-qPCR...