(2)Blasticidin剂量滴定:WT THP-1(严格说这里应该用LentiCas9的对照慢病毒感染的细胞来滴定),12孔板,60万细胞/孔(密度约50%),BSD剂量设置为2/4/6/8/10μg/mL,培养基1mL/well,每天换液,取第4天(96h)可杀死全部细胞的最低剂量。我的实验结果为4μg/mL。
首先,THP1细胞是个密度依赖性很强的细胞系,低密度生长会抑制,高密度则会疯狂生长。所以,控制好密度非常重要。如果实验室条件允许,最好做个细胞计数来确定转染细胞的用量。一般来说,50-100万/ml是它的合适生长密度,但转染时建议取20万-30万/ml左右的密度。我试过很多次,即使没有做细胞计数,只要THP1细胞状态好,...
目的:通过构建慢病毒介导的CD86过表达THP-1细胞,探究CD86过表达THP-1巨噬细胞在马尔尼菲篮状菌(Talaromycesmarneffei,TM)感染中作用. 方法:1.构建慢病毒介导的CD86过表达THP-1细胞:设计目的基因CD86序列引物,PCR扩增制备目的基因片段与线性化载体进行重组反应,获得高纯度慢病毒LV-CD86载体质粒后转染HEK293T细胞进行病毒...