THP-1细胞因其特性,本身就很难转染,所以转染效率普遍偏低。但转染效率太低容易影响后续实验的进行,那么我们可以如何提高转染效率呢? 目前实验中THP-1转染使用较多的方法是:脂质体转染、腺病毒转染、慢病毒转染,其中病毒转染效率相较脂质体转染要高一些,但操作更繁琐、成本也更高。 脂质体转染成本低廉,但细胞毒性较大...
1. 转染效率受转染质粒本身效果影响。瞬时转染宜使用超螺旋DNA；在稳定转染中，细胞对线性DNA的摄取水平低于超螺旋DNA，但它将DNA整合至宿主基因组中的效果更好；2. 一般培养基中加入血清会促进DNA的转染。但脂质体转染和转染RNA时，最好在无血清的情况下进行；3. 在转染之前更换培养基，可提高转染效率，所用培养...
准备转染复合物,三种质粒,目的质粒(包括你的oe 和NC,辅助质粒(这里以二代慢病毒系统为例,psPAX2+pMD2.G两种辅助质粒。)请一定确定自己的目的质粒和它的空白对照是病毒载体的,即可以用来包病毒,一般是含有HIV1结构域。 准备三个2ml的无菌EP管,每个管子加入250uL的空培。然后一个加入oe 和两种辅助质粒,一个加入...
4.细胞换液:转染24小时后对细胞进行正常换液,悬浮细胞转染过程中不用换液。 5.分析结果:质粒DNA转染48-72小时后荧光检测转染效率,48-96小时检测mRNA或蛋白表达。若进行稳定表达细胞株的筛选,则在转染后24-48小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA转染后9小时荧光检测转染效率,48-72小时检测mRNA或蛋白表达。 二、...
WTAP过表达不影响THP-1巨噬细胞中p65的总体表达水平。APS可阻止LPS诱导的THP-1巨噬细胞p65从细胞质向细胞核的易位。然而,在APS处理的THP-1巨噬细胞中,WTAP过表达促进了p65从细胞质向细胞核的易位。为了更好地研究p65的核和细胞质分布,从THP-1巨噬细胞中提取核和细胞质蛋白。结果显示,在转染WTAP过表达质粒的...
WTAP过表达不影响THP-1巨噬细胞中p65的总体表达水平。APS可阻止LPS诱导的THP-1巨噬细胞p65从细胞质向细胞核的易位。然而,在APS处理的THP-1巨噬细胞中,WTAP过表达促进了p65从细胞质向细胞核的易位。为了更好地研究p65的核和细胞质分布,从THP-1巨噬细胞中提取核和细胞质蛋白。结果显示,在转染WTAP过表达质粒的...
1.转染效率受转染质粒本身效果影响。瞬时转染宜使用超螺旋DNA;在稳定转染中,细胞对线性DNA的摄取水平低于超螺旋DNA,但它将DNA整合至宿主基因组中的效果更好; 2.一般培养基中加入血清会促进DNA的转染。但脂质体转染和转染RNA时,最好在无血清的情况下进行; ...
WTAP过表达不影响THP-1巨噬细胞中p65的总体表达水平。APS可阻止LPS诱导的THP-1巨噬细胞p65从细胞质向细胞核的易位。然而,在APS处理的THP-1巨噬细胞中,WTAP过表达促进了p65从细胞质向细胞核的易位。为了更好地研究p65的核和细胞质分布,从THP-1巨噬细胞中提取核和细胞质蛋白。结果显示,在转染WTAP过表达质粒的...
WTAP过表达不影响THP-1巨噬细胞中p65的总体表达水平。APS可阻止LPS诱导的THP-1巨噬细胞p65从细胞质向细胞核的易位。然而,在APS处理的THP-1巨噬细胞中,WTAP过表达促进了p65从细胞质向细胞核的易位。为了更好地研究p65的核和细胞质分布,从THP-1巨噬细胞中提取核和细胞质蛋白。结果显示,在转染WTAP过表达质粒的...
4.细胞换液:转染24小时后对细胞进行正常换液,悬浮细胞转染过程中不用换液。 5.分析结果:质粒DNA转染48-72小时后荧光检测转染效率,48-96小时检测mRNA或蛋白表达。若进行稳定表达细胞株的筛选,则在转染后24-48小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA转染后9小时荧光检测转染效率,48-72小时检测mRNA或蛋白表达。