一、转染材料准备 1. 转染试剂用量:10ul 2. siRNA浓度:20um/L 3. 细胞密度:1*106-1*105 4. 转染用培养板:6孔板 5.转染试剂:Advanced DNA RNA转染试剂;货号:AD600150 6. 转染时间:48小时 7.细胞培养胎牛血清:Z7180FBS-500超低内毒素胎牛血清 ...
目前实验中THP-1转染使用较多的方法是:脂质体转染、腺病毒转染、慢病毒转染,其中病毒转染效率相较脂质体转染要高一些,但操作更繁琐、成本也更高。● 脂质体转染成本低廉,但细胞毒性较大,细胞死亡率较高;● 腺病毒转染可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平,但可能对细胞免疫状态影响大;● 慢病毒转染细胞毒...
Zeta Life 公司与美国加利福尼亚大学旧金山校区联合开发用于哺乳动物细胞、活体动物转染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子转染试剂,此技术成为新的全球蛋白功能、免疫细胞及干细胞治疗、研发及生产的主要关键技术之一。
目前实验中THP-1转染使用较多的方法是:脂质体转染、腺病毒转染、慢病毒转染,其中病毒转染效率相较脂质体转染要高一些,但操作更繁琐、成本也更高。 脂质体转染成本低廉,但细胞毒性较大,细胞死亡率较高; 腺病毒转染可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平,但可能对细胞免疫状态影响大; 慢病毒转染细胞毒性低,但其病...
目前实验中THP-1转染使用较多的方法是:脂质体转染、腺病毒转染、慢病毒转染,其中病毒转染效率相较脂质体转染要高一些,但操作更繁琐、成本也更高。 脂质体转染成本低廉,但细胞毒性较大,细胞死亡率较高; 腺病毒转染可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平,但可能对细胞免疫状态影响大; ...
2.细胞转染时需要注意什么? 1) 细胞活率>90%,细胞状态正常,肉眼看都是圆形透亮、细胞膜完整的细胞 2) 病毒感染法进行正式实验前建议进行预实验找到最适MOI及最佳药筛浓度;确保感染的病毒滴度达标;感染前添加助染剂Polybrene;感染时建议在24孔板或者12孔板内进行...
转染时间:48小时 血清:Z7180FBS-500超低内毒素胎牛血清 细胞冻存:CE70100T无血清细胞冻存液 细胞活检测:K009-500,CCK8 二、操作步骤 提前1 天接种细胞:细胞汇合度在 60-80%左右,再进行转染。 核酸复合物制备:将核酸与转染试剂按照 1:1 关系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混匀,室温静 止 10-15 ...
THP1属于非常难转染的细胞系之一。鉴于瞬转很困难,笔者使用了自己组装的慢病毒感染,构建过表达的稳转细胞株,现将经验分享。 一、293T细胞的复苏及处理 1.复苏293T细胞,这个过程需要注意的是,293T必须没有支原体污染且生长良好。 第一天复苏,以一个10cm大皿为例,要充分混匀293T,使用DMEM高糖培基,然后静置,第二...
目前实验中THP-1转染使用较多的方法是:脂质体转染、腺病毒转染、慢病毒转染,其中病毒转染效率相较脂质体转染要高一些,但操作更繁琐、成本也更高。 脂质体转染成本低廉,但细胞毒性较大,细胞死亡率较高; 腺病毒转染可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平,但可能对细胞免疫状态影响大; ...
本实验拟通过腺病毒,慢病毒,脂质体2000三种方法分别转染THP-1巨噬细胞,探讨转染THP-1巨噬细胞的最佳方法,为THP-1巨噬细胞相关感染实验提供基础。 材料和方法 一、主要材料与试剂 人THP-1细胞来源于南京军区南京总医院呼吸内科实验室;胰酶:碧云天公司;1640细胞培养基(维森特公司);OPTI培养基(美国Gibco公司);胎牛血...