目的为了进一步研究PES1的生物学功能,采用Tet—on系统构建可诱导稳定表达PES1的卵巢癌细胞株SKOV3。方法采用PCR技术将PES1克隆到pTRE—Tight载体中,并进行表达鉴定。将调控质粒pTet—on转染卵巢癌细胞,经G418筛选后再转染pTRE—Tight—PES1,然后经潮霉素筛选出阳性克隆。用不同浓度的强力霉素(Dox)进行诱导后,Western...
该系统以细菌Tet操纵子为基础,对其在真核细胞中的功能进行了修饰和改进。 为了确定最适合不同应用的系统,我们比较了经常使用的细胞类型中的Tet-on变体,这些细胞要么瞬时转染相关质粒,要么稳定地转导“一体式”慢病毒载体。 V10变异体在瞬时转染的细胞中表现最佳,在没有DOX的情况下没有背景活性,高DOX诱导活性和最高...
1862 ·论著· 重庆医学2006年1o月第35卷第2o期 Tet—on系统诱导espl基因表达对A。细胞染色体的影响 刘丽莎,刘昕,程英 (第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室,重庆400038) 摘要:目的 观察肺腺癌A 细胞经Tet—on系统诱导表达espl基因后其染色体数目的改变。方法 利用PTet—on基因表 达调控系统,先后将调控质粒Pt...
目的:引入四环素基因诱导表达系统Tet-On,建立Tet-On诱导基因表达系统的细胞研究平台,诱导SNCA基因及其致病突变基因A30P,A53T在CHO细胞中的表达.方法:CHO细胞的培养:重组质粒pTRE2-SNCA的构建:取胎脑组织约50mg,抽提总RNA,反转cDNA,以设计的SNCA的上下游引物(引入相应酶切位点),以cDNA为模板,通过 PCR调取目的基因,...
而转染的骨髓基质干细胞在未加入诱导剂时,其RLU(relative-luciferase-unit)值也接近空白对照值.结论转染Tet-on基因表达控制系统的骨髓基质干细胞对doxycyline诱导具有较好的反应性,目的基因荧光素酶基因的表达效力对doxycyline具有严格的计量依赖关系.因此,利用Tet-on基因调控系统对目标基因在骨髓基质干细胞中的表达进行...
4-6小时换液的时候加
Tet-on系统是一种高效无毒,具有严密开/关功能的基因调控系统.脂质体转染法是较为常用的将外源基因转入细胞的方法,在转染过程中,很多因素会影响脂质体的转染效率,为了尽可能提高转染率及外源基因的表达水平,试验中对转染及诱导表达条件进行了优化.结果表明:当pBI-EGFP-EGFP:pCAGGS-rtTA2~s-M2为1:2,质粒DNA:Lipofec...
利用Tet-On 3G系统构建了含人IFITM3基因的真核表达质粒p TRE3G-IFITM3,并将其与调控质粒p LVX-Tet3G共转染犬肾细胞(MDCK),转染后48 h用G418和嘌呤霉素进行筛选,用多西环素(Dox)对获得的细胞系进行诱导表达鉴定,并进行Dox敏感性分析,IFITM3+细胞百分数及定位分析.用含萤光素酶(Luciferase)报告基因的禽流感病毒...
Tet-On Advanced Vector转染MCF-7细胞,分别通过G418和嘌呤霉素选择培养,建立由四环素(doxycycline,DOX)诱导表达的稳定转染细胞系,RT-PCR,Western Blot分别检测目的基因EID3在DOX诱导下mRNA以及蛋白的表达.结果成功构建了pLVu-Tight-Puro-EID3表达质粒,并建立了由DOX诱导表达的稳定转染细胞系,可在DOX诱导下稳定表达EID3...
pLenti-TRE-3G四环素诱导慢病毒表达质粒载体系统,与pLenti-CMv-Tet-on 3G配套使用 BioVector NTCC质粒载体菌种细胞基因保藏中心 价格:¥49865 货号:pLenti-TRE-3G 产地:北京 点击询问我要采购 竭诚为您服务! BioVector NTCC典型培养物保藏中心 联系人:Dr.Xu, Biovector NTCC Inc. 电话:400-800-2947 工作QQ:184...