利用tet-on表达调控载体,包装成工具病毒,最后在实验中即可进行相应的基因操作,可直接感染细胞进行基因的诱导表达;也可注射动物,随后通过DOX的小鼠饲养调控工具病毒是否发挥作用。 体外-诱导型慢病毒使用-细胞实验-tet-on慢病毒 在未加入Dox的时候,目的基因也会有非常微弱的表达,这种表达强度随着Dox的增加而增加。 体内...
目的为了进一步研究PES1的生物学功能,采用Tet—on系统构建可诱导稳定表达PES1的卵巢癌细胞株SKOV3。方法采用PCR技术将PES1克隆到pTRE—Tight载体中,并进行表达鉴定。将调控质粒pTet—on转染卵巢癌细胞,经G418筛选后再转染pTRE—Tight—PES1,然后经潮霉素筛选出阳性克隆。用不同浓度的强力霉素(Dox)进行诱导后,Western...
利用tet-on表达调控载体,包装成工具病毒,最后在实验中即可进行相应的基因操作,可直接感染细胞进行基因的诱导表达;也可注射动物,随后通过DOX的小鼠饲养调控工具病毒是否发挥作用。 体外-诱导型慢病毒使用-细胞实验-tet-on慢病毒 在未加入Dox的时候,目的基因也会有非常微...
Tet-on系统是一种基因表达调控技术，其核心在于将带有tet-on元件的载体与目的基因连接，然后将其转入细胞。在细胞培养过程中，如果希望诱导目的基因表达，则需向培养基中添加四环素。四环素的存在会促使tet-on系统启动目的基因的表达，从而实现对基因表达的精确控制。这一过程能够人为调节基因表达的时间和强度...
五、可诱导过表达案例 项目概要:在 Fadu细胞中可诱导过表达CNTNAP2 实验设计:使用: PiggyBac转座子与Tet-On系统共表达质粒 PiggyBac转座子将目标基因与tet-on系统整合到宿主细胞的染色体中,当系统添加了强力抗生素多西环素(doxycycline)时,目标基因会迅速在高水平上表达。
总言之,Tet系统是目前使用最广泛的药物诱导转基因表达系统之一,能够满足科研工作者在时间上控制基因表达的需求,可模拟细胞或机体生长发育不同阶段目的基因的表达变化,进而研究其中的功能和规律。汉恒生物可提供基于慢病毒载体和腺病毒载体的tet-on表达系统,欢迎联系了解咨询~ ...
在Fadu细胞中，使用PiggyBac转座子与Tet-On系统共表达质粒，实现CNTNAP2的可诱导过表达。添加强力抗生素多西环素后，目标基因迅速在高水平上表达。验证结果：qPCR证实，在加入Dox后，Fadu细胞中CNTNAP2实现了可诱导过表达。Tet-On可诱导过表达系统为科研提供新工具，推动生物研究领域的创新。
这种诱导机制使得基因表达具有高度的可控性。 此外,为了保证载体在细胞内的稳定存在和正常功能,Tet - On 诱导表达辅助载体还配备了合适的终止子,确保转录过程的正常终止。同时,通常会有筛选标记基因,比如抗生素抗性基因,用于在转染细胞后筛选出成功摄取载体的细胞。当将该载体与目的基因构建体共同转染到细胞中后,可以在...
Tet-On诱导型基因表达系统是控制哺乳动物细胞中目的基因定时表达的强大工具。Tet-On诱导型基因表达载体作用:当不存在四环素及其类似物(如doxycycline)的情况下,目的基因几乎或完全沉默;当往体系中添加四环素或其他类似物(如doxycycline)时,目的基因得到快速高水平表达。四环素不存在的情况下时,衍生于TeR(Tet抑制蛋白)和KRA...