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此外,为了保证载体在细胞内的稳定存在和正常功能,Tet - On 诱导表达辅助载体还配备了合适的终止子,确保转录过程的正常终止。同时,通常会有筛选标记基因,比如抗生素抗性基因,用于在转染细胞后筛选出成功摄取载体的细胞。当将该载体与目的基因构建体共同转染到细胞中后,可以在含有相应抗生素的培养基中培养细胞,筛选出含有...
Tet 诱导基因表达细胞稳转株构建是一种利用 Tet 调控系统实现可诱导基因表达的技术。 Tet 调控系统主要由 Tet 阻遏蛋白(TetR)和 Tet 响应启动子(Tet-responsive promoter,TetO)组成。在没有四环素或其衍生物(如强力霉素,doxycycline)存在时,TetR 结合在 TetO 上,抑制下游基因的表达。当有四环素或强力霉素存在时,TetR...
项目概要:在 Fadu细胞中可诱导过表达CNTNAP2 实验设计:使用: PiggyBac转座子与Tet-On系统共表达质粒 PiggyBac转座子将目标基因与tet-on系统整合到宿主细胞的染色体中,当系统添加了强力抗生素多西环素(doxycycline)时,目标基因会迅速在高水平上表达。 验证结果:qPCR验证 在加入Dox后,Fadu细胞中可诱导过表达CNTNAP2...
Tet-On® 3G 诱导表达系统实验流程 一、测验 共转染pTRE3G-GOI 载体和pCMV-Tet3G (比例1:4) HeLa 或HEK 293，或靶细胞。Dox诱导目的表达之后，选择合适的特异基因分析方法进行分析目的基因的表达情况，例如：Western blot Northern blot qRT-PCR 基因特异性功能分析 或者，将pTRE3G-GOI载体转染Tet-On 3G ...
S2.用所述重组慢病毒转导Vero E6细胞,筛选获得由tet on调控表达S蛋白的稳转细胞株,即所述细胞合胞体病变模型; 所述S蛋白DNA序列经过密码子优化策略优化修饰,并在上游添加了Kozak consensus序列,起始密码子ATG之后添加了一个丙氨酸密码子GCC,所述S蛋白DNA序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示或其功能等价物,所述功能...
五、筛选二次稳转细胞系 1.诱导表达检测24个Tet-On3G克隆,分别取1/3量的细胞团接种到6-孔板的1个孔中,共接种24个 6-孔板,正常培养。 2.将剩下的2/3量的细胞团分成两份各接种到6-孔板的1个孔中,共接种48个6-孔板分A组和B组。 将上述48个样本过夜培养。给A组更换添加Dox(100–1,000ng/ml)的新鲜...
利用Tet-On ® 3G系统和Tet-On ® Advanced系统,分别建立稳定 表达转录激活蛋白和荧光素酶的HLF33细胞系,在这2种二次稳转细胞 系中调节基因和应答基因的插入位点相同,然后使用一定范围浓度的 Dox诱导这2种二次稳转细胞系并检测荧光素酶的表达情况。结果表 ...
四环素诱导系统因其强大的基因调控作用受到众多研究者的青睐,海星生物利用二代Tet-ON 系统,将Tet-on系统与Piggybac转座子载体结合,推出基于四环素诱导系统的过表达稳转株构建服务,在减少泄露的同时,可实现大片段的基因组稳定整合,表型稳定,表达效率高,省去病毒包装周期,缩短实验周期的同时实现目的基因的稳定开合。
表达宿主:哺乳细胞 诱导方式:四环素诱导 5'测序引物:CMV-F:CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG 3'测序引物:根据序列设计引物 质粒简介: pLVX-Tet-On-Advanced是Tet-On系统的调控载体,与之对应的应答载体是pLVX-Tight-puro. 质粒图谱: 货号产品名称规格库存价格数量购买 ...