siRNA是通过RNAi机制发挥其作用:将双链 RNA(dSRNA)导入体内后,会被特定的核糖核酸酶 (Dicer) 切割成长度为21~23个碱基对的小片段,这些小片段称为siRNA。siRNA进入细胞后,细胞质内的Ag02酶会将siRNA的正义链裂解,反义链则会被装载到RNA诱导的沉默复合体...
首先,长双链RNA (dsRNA)被核酸内切酶Dicer蛋白加工成小干扰RNA (siRNA)双链;随后,siRNA与Argonaute-2 (AGO2)蛋白结合,该蛋白被认为是称为RNA诱导沉默复合物(RISC)的多蛋白复合物的核心;然后siRNA被分离成两条单链:引导链(Guide strand)和传递链(Passenger strand);最后,传递链被降解,引导链- RISC复合物结合到...
由于siRNA在肠道环境中的不稳定性，皮下注射途径受亲脂性和载体大小的限制。此外，siRNA是一种带负电荷的分子，siRNA几乎不可能穿过生物膜。大多数裸或未修饰的siRNA的半衰期在5-10分钟之间。因此，治疗性siRNA治疗通常选择静脉注射途径，且需选择合适的递送系统来保护裸siRNA，避免未修饰siRNA被内源性酶降解。（2）...
3.siRNA序列设计的靶序列一般为目的基因的CDS序列。 4.一般siRNA需设计2-4条,另需要对照1-2条,序列设计完成后需要在BLAST中(BLAST: Basic Local Alignment Search Tool (http://nih.gov)进行比对,选择与靶基因特异性结合的序列进行合成即可。 上述原则是在设计siRNA时可以选择的一些参数,此外还有较为细节的原则如...
三、高纯度无菌 siRNA 的制备方法 （一）化学合成法 合成过程 化学合成法是制备高纯度无菌 siRNA 的常用方法之一。通过固相合成技术，可以精确地合成特定序列的 siRNA。合成过程中，首先将核苷酸单体依次连接在固相载体上，形成寡核苷酸链。然后，通过脱保护、纯化等步骤，得到高纯度的 siRNA。优势与挑战 化学合成法具有...
siRNA 表达质粒或病毒载体细胞中的表达 PCR 来源 siRNA 表达盒细胞中的表达 前三种方法涉及 siRNA 的体外制备,然后通过脂质转染法、电穿孔或其他技术直接引入哺乳动物细胞。最后两种方法均依赖于在细胞中引入表达 siRNA 的基于 DNA 的载体和表达盒。下表 1 总结了这些方法。
图2 siRNA 作用机制 (A)常见siRNA传递系统; (B)作用机制, 1)siRNA通过合适的纳米载体进入细胞, 2)siRNA在细胞质内与核糖核蛋白(称为rna诱导沉默复合体(RISC))结合, 3)siRNA的引导链由(RISC)中的Argonaute蛋白维持,乘客链被降解,4)激活的RISC识别目标基因的互补...
至暗时刻:难以突破的siRNA成药关键 2006年,Alnylam正式投入开发siRNA药物的工作中,也因此直面了siRNA成药的第一大难题——如何把siRNA递送至细胞内。 由于细胞膜的选择透过性,大分子物质无法直接通过,而siRNA分子体积大,带电性强,自然是难以透过细胞膜的。siRNA的另一递送难点在于易于生物降解,容易刺激免疫反应,在体...
siRNA Small interfering RNA,小分子干扰RNA。通常以双链形式存在,单链形式起效。分子量居中,约13kDa。主要通过RISC(RNA-induced silencing complex)抑制目标mRNA翻译为蛋白,or silencing。 mRNAmessenger RNA,信使核糖核酸。单链,分子量大,且跨度大,约340~2300kDa。主要作用为蛋白的表达,所以通常用作蛋白补充疗法,或者...
图中的大多数网址已经不可用了,其中http://sirna.wi.mit.edu/home.php(需要简单注册,但功能强大,给出了siRNA的热力学差异,界面也比较友好,强烈推荐),https://sfold.wadsworth.org/cgi-bin/sirna.pl(无需注册,靶标序列要求在250bp以内,不够简洁但内容丰富),http://sidirect2.rnai.jp/(siDirect 2.0,无需注...