siRNA是通过RNAi机制发挥其作用:将双链 RNA(dSRNA)导入体内后,会被特定的核糖核酸酶 (Dicer) 切割成长度为21~23个碱基对的小片段,这些小片段称为siRNA。siRNA进入细胞后,细胞质内的Ag02酶会将siRNA的正义链裂解,反义链则会被装载到RNA诱导的沉默复合体...
1. 请利用对数生长期细胞做siRNA转染实验,一般在细胞传代后24 -36 h,开始转染siRNA,可以保证转染效率。 2. 细胞密度对转染效率也具有很大的影响,请选择汇合度为30-70%的对数生长期细胞进行siRNA转染实验,可以取得较高的转染效率。细胞密度过高或过低则降低转染效率。 3. siRNA干粉溶解后请分装,并保存在-80 ℃,...
由于siRNA在肠道环境中的不稳定性，皮下注射途径受亲脂性和载体大小的限制。此外，siRNA是一种带负电荷的分子，siRNA几乎不可能穿过生物膜。大多数裸或未修饰的siRNA的半衰期在5-10分钟之间。因此，治疗性siRNA治疗通常选择静脉注射途径，且需选择合适的递送系统来保护裸siRNA，避免未修饰siRNA被内源性酶降解。（2）...
首先,长双链RNA (dsRNA)被核酸内切酶Dicer蛋白加工成小干扰RNA (siRNA)双链;随后,siRNA与Argonaute-2 (AGO2)蛋白结合,该蛋白被认为是称为RNA诱导沉默复合物(RISC)的多蛋白复合物的核心;然后siRNA被分离成两条单链:引导链(Guide strand)和传递链(Passenger strand);最后,传递链被降解,引导链- RISC复合物结合到...
然而,很多实验人员都发现在多数情况下自己使用的转染方法、转染试剂、细胞选择等等操作都没问题,转染实验会失败仅仅是因为siRNA本身的质量不过关。而且除了实验组的siRNA,有时还存在着对照组siRNA出现质量问题的情况 实际上在基因干扰实验中,实验人员往往根据自身需求自行合成siRNA。目前siRNA合成的方法主要包括以下五种:1...
siRNA是RNAi技术的一种延伸，RNAi的沉默技术可用于为多种疾病设计治疗方式，例如由一个或几个基因引起的疾病遗传缺陷、病毒性疾病、自身免疫性疾病和癌症。鉴于RNAi独特的作用机制优势，siRNA也具备独特的成药优势。高特异性：siRNA与其靶标的结合具有高度选择性，通过使用大约mRNA全长来识别靶序列并介导其切割。可以区分...
英克司兰的上市让国内心血管疾病患者有了更多的治疗选择,从其机制以及所取得的临床研究结果来看,有理由相信这一款创新siRNA药物能够极大帮助患者血脂达标,进而改善短期和长期预后。 英克司兰安全性: 从目前循证证据来看,关键性3期研究(ORION-9/-10/-11),以及最长达6年的延长研究(ORION-...
三、高纯度无菌 siRNA 的制备方法 （一）化学合成法 合成过程 化学合成法是制备高纯度无菌 siRNA 的常用方法之一。通过固相合成技术，可以精确地合成特定序列的 siRNA。合成过程中，首先将核苷酸单体依次连接在固相载体上，形成寡核苷酸链。然后，通过脱保护、纯化等步骤，得到高纯度的 siRNA。优势与挑战 化学合成法具有...
siRNA即小干扰RNA（Small interfering RNA），是一类长度为21-25 bp的双链RNA（dsRNA）分子，已广泛用于RNA干扰（RNAi）技术，通过引起同源mRNA发生高度特异性降解，实现RNA转录后抑制特定基因的表达。通过外源性或内源性的双链RNA（dsRNA）在细胞内被Dicer酶（核糖核酸内切酶）切割，产生具5’单磷酸和3’羟基末端，...
小干扰核糖核酸(siRNA)药物通常与靶向下游蛋白药物不同,siRNA靶向上游信使核糖核酸(mRNA),主要针对靶向小分子和单抗无法成药的靶点[1]。siRNA药物递送系统成功发挥作用的关键在于能克服递送过程中的生理屏障及内源性核酸酶降解,使该类药物成功递送进靶细胞并发挥治疗作用[1]。目前应用较成熟的偶联siRNA药物主要基于N...