siRNA是通过RNAi机制发挥其作用:将双链 RNA(dSRNA)导入体内后,会被特定的核糖核酸酶 (Dicer) 切割成长度为21~23个碱基对的小片段,这些小片段称为siRNA。siRNA进入细胞后,细胞质内的Ag02酶会将siRNA的正义链裂解,反义链则会被装载到RNA诱导的沉默复合体...
首先,长双链RNA (dsRNA)被核酸内切酶Dicer蛋白加工成小干扰RNA (siRNA)双链;随后,siRNA与Argonaute-2 (AGO2)蛋白结合,该蛋白被认为是称为RNA诱导沉默复合物(RISC)的多蛋白复合物的核心;然后siRNA被分离成两条单链:引导链(Guide strand)和传递链(Passenger strand);最后,传递链被降解,引导链- RISC复合物结合到...
3.siRNA序列设计的靶序列一般为目的基因的CDS序列。 4.一般siRNA需设计2-4条,另需要对照1-2条,序列设计完成后需要在BLAST中(BLAST: Basic Local Alignment Search Tool (http://nih.gov)进行比对,选择与靶基因特异性结合的序列进行合成即可。 上述原则是在设计siRNA时可以选择的一些参数,此外还有较为细节的原则如...
控制您的 siRNA 研究 | 经验证的 siRNA 对照品及匹配的一抗 设计RNAi 实验时控制细胞检测的变异性 描述存活素在肿瘤形成过程中的作用:siRNA 研究 siRNA 诱导的基因沉默的持续时间 确保RNAi 成功 增强siRNA 递送和长期基因沉默 siRNA 实验中的实验变异性和重复...
siRNA是RNAi技术的一种延伸，RNAi的沉默技术可用于为多种疾病设计治疗方式，例如由一个或几个基因引起的疾病遗传缺陷、病毒性疾病、自身免疫性疾病和癌症。鉴于RNAi独特的作用机制优势，siRNA也具备独特的成药优势。高特异性：siRNA与其靶标的结合具有高度选择性，通过使用大约mRNA全长来识别靶序列并介导其切割。可以区分...
至暗时刻:难以突破的siRNA成药关键 2006年,Alnylam正式投入开发siRNA药物的工作中,也因此直面了siRNA成药的第一大难题——如何把siRNA递送至细胞内。 由于细胞膜的选择透过性,大分子物质无法直接通过,而siRNA分子体积大,带电性强,自然是难以透过细胞膜的。siRNA的另一递送难点在于易于生物降解,容易刺激免疫反应,在体...
1. 请利用对数生长期细胞做siRNA转染实验,一般在细胞传代后24 -36 h,开始转染siRNA,可以保证转染效率。 2. 细胞密度对转染效率也具有很大的影响,请选择汇合度为30-70%的对数生长期细胞进行siRNA转染实验,可以取得较高的转染效率。细胞密度过高或过低则降低转染效率。 3. siRNA干粉溶解后请分装,并保存在-80 ℃,...
siRNA即小干扰RNA（Small interfering RNA），是一类长度为21-25 bp的双链RNA（dsRNA）分子，已广泛用于RNA干扰（RNAi）技术，通过引起同源mRNA发生高度特异性降解，实现RNA转录后抑制特定基因的表达。通过外源性或内源性的双链RNA（dsRNA）在细胞内被Dicer酶（核糖核酸内切酶）切割，产生具5’单磷酸和3’羟基末端，...
三、高纯度无菌 siRNA 的制备方法 （一）化学合成法 合成过程 化学合成法是制备高纯度无菌 siRNA 的常用方法之一。通过固相合成技术，可以精确地合成特定序列的 siRNA。合成过程中，首先将核苷酸单体依次连接在固相载体上，形成寡核苷酸链。然后，通过脱保护、纯化等步骤，得到高纯度的 siRNA。优势与挑战 化学合成法具有...
在基因表达调控中,siRNA、shRNA和sgRNA扮演着举足轻重的角色,它们对于调控基因表达、剖析基因功能以及开创新型治疗手段具有不可估量的价值。尽管它们的目标趋同,即通过遏制或修改特定基因的表达来调控细胞机能,但在构造、作用原理和应用场景上却各具千秋。siRNA以其直接和高效的特点在短期基因沉默实验中大显身手;shRNA则...