1)储存液准备:siRNA使用前瞬时离心,用RNase-free H2O或灭菌ddH2O配制成20μM/L储存液,分装保存,避免反复冻融(建议不超过5次)。 2)细胞接种: 贴壁细胞:转染前24小时接种0.5 - 2×105个细胞,转染时细胞融合度为30 - 50%。(铺板时要将细胞消化完全混匀,避免细胞堆积生长) 悬浮细胞:转染前24小时接种0.5 - 2...
siRNA转染是基因调控的重要手段,本文详细介绍了转染实验的步骤和注意事项,帮助你顺利完成实验。🔬 实验步骤: 准备细胞:取出细胞,去除原培养基,每孔加入500μL 1×PBS润洗细胞,再次去除PBS。 加入无血清培养基:每孔细胞加入400μL无血清培养基,再加入步骤4中混匀静置后的试剂,轻柔摇匀,将细胞放入培养箱中孵育12-...
siRNA转染实验步骤如下：1.设计siRNA：基于目标基因序列，使用在线工具或商业实验室进行siRNA设计。建议设计2-3条siRNA并进行验证，以确保特异性和有效性。2.合成siRNA：将设计好的siRNA合成，并进行纯化和浓缩。通常可以选择购买现成的siRNA，也可以使用自行合成的siRNA。3.细胞培养：将所需细胞培养到适当的数量和密度。
(1) 细胞用PBS清洗1-2次,将上述350µL转染试剂-siRNA复合物加入每孔细胞。 (2) 在 37℃,5% CO2 培养箱培养 24-48 h,无需更换新的培养液,之后即可检测基因干扰效果或者后续功能实验。注:可在转染12h后补充500 μL完全培养基 (含血清)。 siRNA转染试剂推荐 EZ Trans siRNA转染试剂,是一种基于阳离子高分...
荧光显微镜（可选）：如果使用带有荧光标记的 siRNA 或转染试剂，可通过荧光显微镜观察转染效率和细胞内 siRNA 的分布情况。三、转染步骤 （一）细胞培养与计数 在无菌条件下，将悬浮细胞接种于合适的培养瓶或培养板中，加入适量的细胞培养基，轻轻摇匀，使细胞均匀分布。将细胞培养物置于细胞培养箱中，在适宜的条件下...
等24小时后,细胞融合度达到50%-60%就可以进行转染了。如果是悬浮细胞,每孔种5*10^5个细胞。 转染步骤 💉 转染步骤稍微复杂一点,但也很关键。具体操作如下: A. 取1.25ul的siRNA储备液,用50ul的Opti-MEM稀释,吹打混匀。 B. 取1ul的lipo3000,同样用50ul的Opti-MEM稀释,吹打混匀。
1️⃣ 首先,确保你购买的siRNA是干粉状态,需要使用DEPC水进行溶解。具体加水量和母液浓度可以参考相关指南。 2️⃣ 转染时,需要设置不同的分组: siRNA敲低组:进行基因敲低实验。 阴性对照组:用于比较。 FAM荧光对照:用于检测转染效率。 阳性对照组:确保转染过程正确,且siRNA有效。 3️⃣ 储存siRNA母液时...
2.转染过程: 取0.67μg (50pmol)的siRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制成RNA稀释液,终体积为25μl。注意:无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。 取1μl的EntransterTM-R4000,然后加入24μl无血清稀释液体,充分混匀,制成EntransterTM-R4000稀释液,终体积为25μl。室温静置5分钟。 将...
siRNA转染步骤—悬浮细胞 6孔板实验为例: 1、转染的当天,收集细胞离心,用含FBS的培养基重悬。 2、在250 μl的无血清生长培养基(或Opti-MEM® I无血清培养基)中加入100 pmole siRNA,柔和混匀。 3、Lipofectamine RNAiMAX使用前要先混匀,然后在250 μl生长培养基中(或Opt...
siRNA储存常规化学合成的siRNA序列为21～23nt的双链小分子RNA，为冻干粉形式的即用型试剂 ，在常温不溶解的情况下可以保存至少1个月时间，放置于-20℃～-80℃低温环境中，冻干粉可以稳定保存一年。02- 转染试剂储存4℃保存，不可冷冻。03-体外转染操作流程：第一步、接种细胞：建议提前一天接种细胞，...