1)储存液准备:siRNA使用前瞬时离心,用RNase-free H2O或灭菌ddH2O配制成20μM/L储存液,分装保存,避免反复冻融(建议不超过5次)。 2)细胞接种: 贴壁细胞:转染前24小时接种0.5 - 2×105个细胞,转染时细胞融合度为30 - 50%。(铺板时要将细胞消化完全混匀,避免细胞堆积生长) 悬浮细胞:转染前24小时接种0.5 - 2...
siRNA转染实验步骤如下：1.设计siRNA：基于目标基因序列，使用在线工具或商业实验室进行siRNA设计。建议设计2-3条siRNA并进行验证，以确保特异性和有效性。2.合成siRNA：将设计好的siRNA合成，并进行纯化和浓缩。通常可以选择购买现成的siRNA，也可以使用自行合成的siRNA。3.细胞培养：将所需细胞培养到适当的数量和密度。
sirna转染实验步骤(以 24 孔板为例) 1. 接种细胞 对于贴壁细胞:转染前一天,将细胞按照每孔1-2x10^5个细胞的量进行铺板,使其在转染时密度为60%-80% 为佳。 对于悬浮细胞:转染当天,配制转染试剂-核酸复合物之前,用PBS清洗细胞1-2次,用250 μL Opti-MEM I 减血清培养基 (无血清) 重悬细胞,在24孔板中进...
2.转染过程: 取0.67μg (50pmol)的siRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制成RNA稀释液,终体积为25μl。注意:无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。 取1μl的EntransterTM-R4000,然后加入24μl无血清稀释液体,充分混匀,制成EntransterTM-R4000稀释液,终体积为25μl。室温静置5分钟。 将...
siRNA储存常规化学合成的siRNA序列为21～23nt的双链小分子RNA，为冻干粉形式的即用型试剂 ，在常温不溶解的情况下可以保存至少1个月时间，放置于-20℃～-80℃低温环境中，冻干粉可以稳定保存一年。02- 转染试剂储存4℃保存，不可冷冻。03-体外转染操作流程：第一步、接种细胞：建议提前一天接种细胞，...
等24小时后,细胞融合度达到50%-60%就可以进行转染了。如果是悬浮细胞,每孔种5*10^5个细胞。 转染步骤 💉 转染步骤稍微复杂一点,但也很关键。具体操作如下: A. 取1.25ul的siRNA储备液,用50ul的Opti-MEM稀释,吹打混匀。 B. 取1ul的lipo3000,同样用50ul的Opti-MEM稀释,吹打混匀。
siRNA转染步骤—悬浮细胞 6孔板实验为例: 1、转染的当天,收集细胞离心,用含FBS的培养基重悬。 2、在250 μl的无血清生长培养基(或Opti-MEM® I无血清培养基)中加入100 pmole siRNA,柔和混匀。 3、Lipofectamine RNAiMAX使用前要先混匀,然后在250 μl生长培养基中(或Opt...
转染步骤: ① Opti-MEM + Lipo3000 ② Opti-MEM + 质粒或siRNA + P3000(转染质粒时需要,转染siRNA时不需要) 把②加入①,混匀,室温孵育10-15分钟,加入培养的细胞中,1-3天后收样提RNA或蛋白。 注意事项: 1. 细胞密度:转染时细胞密度约70-90%,有助于平衡毒性和转染效率。 2. 培养基稀释:使用无血清的培...
今天我们来聊聊SiRNA转染的那些事儿。其实,这个过程听起来有点复杂,但只要掌握了步骤和方法,真的不难。下面我就一步步给大家详细讲解一下。 饥饿处理 🍽️ 首先,我们要给细胞来个“饥饿疗法”。用PBS洗两遍,然后把细胞培养液换成1750ul的opti MEM。这个过程叫做饥饿处理,目的是让细胞准备好接受新的“食物”...
面对男转染细胞,如原带细胞、干细胞及B细胞系,可考虑选择电穿孔法。 01:05 准备好sirna和转染试剂后,小M带你来操作一遍如何进行s sir RNA转染,转染前请确保细胞密度事宜60%~80%,并提前一天接种。制备传染复合物时,将SIRNA与转染试剂在无血清培养基中稀释并混合,室温敷育15~30分钟,随后向细胞中加入转染复合物...