1)储存液准备:siRNA使用前瞬时离心,用RNase-free H2O或灭菌ddH2O配制成20μM/L储存液,分装保存,避免反复冻融(建议不超过5次)。 2)细胞接种: 贴壁细胞:转染前24小时接种0.5 - 2×105个细胞,转染时细胞融合度为30 - 50%。(铺板时要将细胞消化完全混匀,避免细胞堆积生长) 悬浮细胞:转染前24小时接种0.5 - 2...
siRNA转染实验步骤如下：1.设计siRNA：基于目标基因序列，使用在线工具或商业实验室进行siRNA设计。建议设计2-3条siRNA并进行验证，以确保特异性和有效性。2.合成siRNA：将设计好的siRNA合成，并进行纯化和浓缩。通常可以选择购买现成的siRNA，也可以使用自行合成的siRNA。3.细胞培养：将所需细胞培养到适当的数量和密度。
siRNA的作用机理在于其引起靶基因mRNA的降解，因此mRNA的降解水平是siRNA 沉默效率的直接证明。一般在siRNA转染后24小时后即可检测到靶mRNA水平的降低，可采用细胞总RNA提取，全长cDNA合成，荧光定量实验即可检测到mRNA 的敲除效率。• 蛋白水平 - WB检测 siRNA引起靶基因mRNA的降解，从而影响了靶蛋白的表达。但蛋白水...
2.转染过程: 取0.67μg (50pmol)的siRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制成RNA稀释液,终体积为25μl。注意:无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。 取1μl的EntransterTM-R4000,然后加入24μl无血清稀释液体,充分混匀,制成EntransterTM-R4000稀释液,终体积为25μl。室温静置5分钟。 将...
siRNA储存常规化学合成的siRNA序列为21～23nt的双链小分子RNA，为冻干粉形式的即用型试剂 ，在常温不溶解的情况下可以保存至少1个月时间，放置于-20℃～-80℃低温环境中，冻干粉可以稳定保存一年。02- 转染试剂储存4℃保存，不可冷冻。03-体外转染操作流程：第一步、接种细胞：建议提前一天接种细胞，...
① 以下是siRNA转染至受体细胞的步骤：☆ 设计siRNA：首先，需要基于目标基因序列设计siRNA。可以使用在线工具或商业实验室进行设计（Like us）。一般建议设计2-3条siRNA并进行验证，以确保特异性和有效性。☆ 合成siRNA：将设计好的siRNA通过化学合成方法制备出来，并进行纯化和浓缩。通常选择购买现成的siRNA（We have ...
siRNA转染步骤—悬浮细胞 6孔板实验为例: 1、转染的当天,收集细胞离心,用含FBS的培养基重悬。 2、在250 μl的无血清生长培养基(或Opti-MEM® I无血清培养基)中加入100 pmole siRNA,柔和混匀。 3、Lipofectamine RNAiMAX使用前要先混匀,然后在250 μl生长培养基中(或Opt...
转染步骤:① Opti-MEM + Lipo3000② Opti-MEM + 质粒或siRNA + P3000(转染质粒时需要,转染siRNA时不需要)把②加入①,混匀,室温孵育10-15分钟,加入培养的细胞中,1-3天后收样提RNA或蛋白。注意事项:1. 细胞密度:转染时细胞密度约70-90%,有助于平衡毒性和转染效率。
荧光显微镜（可选）：如果使用带有荧光标记的 siRNA 或转染试剂，可通过荧光显微镜观察转染效率和细胞内 siRNA 的分布情况。三、转染步骤 （一）细胞培养与计数 在无菌条件下，将悬浮细胞接种于合适的培养瓶或培养板中，加入适量的细胞培养基，轻轻摇匀，使细胞均匀分布。将细胞培养物置于细胞培养箱中，在适宜的条件下...
🏃♂️ 转染步骤 细胞铺板:通常在转染前一天进行细胞铺板,根据细胞生长速度计数后进行铺板,确保第二天转染时细胞密度达到80%~90%左右。 细胞转染:以Lip2000作为转染试剂为例,在转染前更换细胞培养基(无双抗,无血清),用Opti-MEM稀释质粒或siRNA,另用Opti-MEM稀释Lip2000,将两者配好静置2~3分钟后,混匀在...