SEC-HPLC进行蛋白纯度分析时出现蛋白粘柱子是因为蛋白与柱填料发生了可逆或不可逆的相互作用,导致峰展宽、拖尾甚至不出峰等现象,影响蛋白的准确定量。为了解决这一问题,可以在流动相中添加减少相互作用的添加剂,例如提高盐浓度、添加精氨酸和有机溶剂等。
SEC-HPLC(尺寸排阻高效液相色谱)是一种基于分子大小分离的HPLC技术。它利用具有不同孔径的固定相(填料)对样品中的蛋白质进行分离,使得大分子先于小分子通过色谱柱,从而实现蛋白质的分离和纯度分析。 二、HPLC蛋白纯度分析原理 HPLC蛋白纯度分析的原理基于蛋白质在移动相(溶剂)中通过固定相(色谱柱填料)时的相对迁移速率。
在变性 SEC-HPLC分析的情况下,由于SDS的存在,多聚体含量则与非还原CE-SDS的分析结果基本一致。所以与非还原 CE-SDS相比, SEC-HPLC可更加客观地评价样品中总多聚体的百分比含量。该研究分析的单抗样品多聚体主要是以非共价键的形式连接,所以应注意两种方法所得到的多聚体含量结果具有不同的含义,在分析多聚体含量...
根据云舟生物提供样品EGFP IVT mRNA(长度:998 nt,浓度:1129 ng/μL),艾杰尔飞诺美应用科学家通过采用最新推出的Biozen dSEC-7体积排阻色谱柱进行SEC-HPLC的研究,实验结果发现Biozen 3μm dSEC-7 300×4.6 mm色谱柱能够对mRNA聚集体实现有效分离。 Biozen dSEC-7创新性地解决了传统SEC色谱柱应用于大分子纯度检测的...
Acclaim SEC-1000 HPLC 色谱柱 ✓ 用于高分辨率分离 mAb,包括单体、聚合体以及蛋白质水解产生的 Fab & Fc 片段 ✓ 用于分离质量为 100 ~ 50,000 Dalton 的 PEG 化分析物等其他化合物中的 mAb 偶联物 ✓用于分离质量为 1,000 ~ 1,000,000 Dalton 的 PEG 化...
一、从SEC-HPLC转换为SEC-UHPLC时的条件变更 USP中规定了使用L59型色谱柱分析抗体的多聚体、单体和片段。其中,比较有代表性的是将TSKgel G3000SWXL(5μm, HPLC)转换为TSKgel UP-SW3000-LS(2μm,UHPLC) 。除此以外,还可以将用于分离抗体片段的TSKgel G2000SWXL色谱柱转换为TSKgel UP-SW2000。将用于分离...
HPLC-SEC分析是确定治疗性蛋白质纯度的重要工具,并且在全世界范围内用作测量聚合物含量和污染物百分比(单克隆抗体制造过程)的标准方法。 鉴于蛋白质的完整性——在这种情况下,单克隆抗体由于温度变化、机械应力影响、pH波动和生产过程中以及整个生命周期中的紫外线照射的影响而受到威胁(另见[3]),因此,建立确定单克隆...
中检院的研究人员通过非还原CE-SDS及常规/变性SEC-HPLC方法，评估了一种抗VEGF单抗的大小异质性。结果显示，非还原CE-SDS的多聚体含量低于常规SEC-HPLC，而与变性SEC-HPLC结果一致，说明SDS的存在能解离非共价结合的多聚体，使分析结果更加客观。对于片段分析，非还原CE-SDS能更准确地检测到降解片段，...
按种类划分,尺寸排阻色谱(SEC)HPLC柱行业可细分为内径 46-78 毫米, 内径46毫米以下, 内径78毫米以上。按最终用途划分,尺寸排阻色谱(SEC)HPLC柱可应用于生物聚合物(肽、蛋白质、核酸等)分析, 非生物聚合物分析等领域。 国内尺寸排阻色谱(SEC)HPLC柱行业头部企业包括Agilent Technologies, Bio-Rad, Danaher Life ...
图2.HPLC-SEC (30cm色谱柱×2支) 转换为UHPLC-SEC (30cm色谱柱) 的分离例 03 梯度分离时从HPLC转换为UHPLC 修订后的USP给出了使用梯度分离的其他色谱分析模式从HPLC转换为UHPLC的规定。进行梯度分离时,需要追加设定梯度体积、梯度坡度等项目。关于复杂的条件设定,由于主要设备制造商的UHPLC系统支持符合USP规定的...