Ohsawa 等报道了一种改进的银染方法,可检测小至 10-15g ( femtograms, 飞克)的蛋白。由于银染的灵敏度高,各大公司均生产银染试剂盒。 银染的机制是将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,以使银颗粒沉积在蛋白带上。用银染蛋白的吸光度对它们的浓度作图呈现不同...
1. 电泳结束后取出凝胶，放置容器中倒入染色液以覆盖凝胶为宜，一般30ml即可。2. 放置摇床染色2-10分钟即可。染液呈酸性，请勿徒手触碰染液，如蛋白量较低，胶过厚，可适当延长染色时间。染液可重复利用3次，随着使用次数的增加，染色速度会下降，但不影响灵敏度。3.染色结束后，无需脱色液洗脱，只需将蛋白凝胶放...
在现在的蛋白染色方法中,考马斯亮蓝染色法是最为常用的[2],虽然这种方法染色时间较长,但是其染色效果好,又比较简便,且银染法染色虽然灵敏度很高[3],但是实验试剂盒价格较高,实验操作步骤繁杂,实验时间较长,需要投入大量金钱和精力。所以在本实验中选择进行固定和染色,再脱色的方法,但由于条件有限,并没有使用加热...
使用方法: 1、 将电泳后的 PAGE 胶取下放入塑料容器中,加入适量染色液(以刚刚覆盖过胶面为适)。 2、 摇床上常温摇动10-20分钟。 3、 观察结果。 特点 · 1.室温下10min内可显现蛋白条带,无需脱色。 · 2.无毒无刺激气味。 · 3.灵敏度高,ng级蛋白,条带清晰。 注意事项: 1、常规染色所需的漂洗...
染色时间一般为 1 2 小时,使蛋白条带显色。 染色完成后,将凝胶转移至脱色液(甲醇 乙酸 水,体积比 25:10:65)中脱色,期间需多次更换脱色液,直至背景清晰,蛋白条带清晰可见,脱色时间约 2 4 小时。 纯度标准。 1. 条带数量判断: 理想情况下,纯蛋白在 SDS PAGE 凝胶上应呈现单一的条带。若出现多条条带,...
SDS-PAGE快速染色脱色方法 在用SDS-凝胶电泳法测定蛋白质分子量时，应注意以下几个问题：1．如果蛋白质-SDS复合物不能达到1.4克SDS/1克蛋白质的比率并具有相同的构象，就不能得到准确的结果。影响蛋白质和SDS结合的因素主要有以下3个：（1）二硫键是否完全被还原：只有在蛋白质分子内的二硫键被彻底还原的情况...
摘自Takara商品名目--试验室常规试剂配制方法 TEMED TEMED原液直接使用 考马斯亮蓝R-250染色液 【组分浓度】0.1%(w/v)考马斯亮蓝R-250,25%(v/v)异丙醇,10%(v/v)冰醋酸 分别胶 分别胶 考马斯亮蓝R-250 1.0g 0.4g 异丙醇 250ml 100ml 搅拌溶解,可用甲醇替代 冰醋酸 100ml 40ml 搅拌均匀 去离子水 65...
SDS聚丙烯酰胺凝胶染色是蛋白质研究的一个基础方法。染色方法有很多,实际应用中,考马斯亮蓝染色(考染)和银染是运用的最多的方法。 考马斯亮蓝G250在游离状态下呈红色,它与蛋白质结合后变为蓝色,结合物在595 nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。
将凝胶冲洗后浸泡在染色液中，置于摇床上37℃染色2h或者室温染色过夜（快速染色可用微波炉煮沸后静置10min，2-3次重复），染色液可回收重复利用。7．脱色 染色结束后，将凝胶漂洗后浸泡在脱色液中，置于摇床上脱色过夜，其间更换脱色液3次；或采用快速脱色，微波炉煮沸后静置15min，3-4次重复，每次均换新脱色液。