首先通过SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳使蛋白质样本分离,再将凝胶上的蛋白电泳转移到固相载体上(NC膜或者PVDF膜),方便后续印迹显影操作,然后使用封闭液将封闭非特异位点,以避免抗体的非特异性吸附,这样固定的蛋白质即可与特异性的多克隆或单克隆抗体相互作用。最后通过化学发光法或荧光方法进行蛋白条带显影。 其中SDS聚丙烯...
SDS_PAGE电泳技术分析蛋白质的研究
PAGE),简称SDS电泳[1],主要用于蛋白质亚基分子量测定。SDS凝胶电泳是定量、比较和识别蛋白质的常用方法。具有经济、速度、重复的特点。它可以根据蛋白质的分子量来分离。 在现在的蛋白染色方法中,考马斯亮蓝染色法是最为常用的[2],虽然这种方法染色时间较长,但是其染色效果好,又比较简便,且银染法染色虽然灵敏度很...
经济:每块胶仅需25ml染色液 操作说明: 电泳结束后,每块凝胶加入100ml去离子水,微波加热30s,水平摇床震荡漂洗5分钟,重复三次。 (此步为关键步骤,会极大的影响染色效果和灵敏度) 每块凝胶加25ml染色液,微波加热15s,水平摇床震荡。 蛋白条带会在10分钟开始逐渐显现,在1小时内达到90%染色效果。 脱色步骤一般没有必要...
电泳结束后,每块凝胶加入100ml去离子水,微波加热30s,水平摇床震荡漂洗5分钟,重复三次。 (此步为关键步骤,会极大的影响染色效果和灵敏度) 每块凝胶加25ml染色液,微波加热15s,水平摇床震荡。 蛋白条带会在10分钟开始逐渐显现,在1小时内达到90%染色效果。
••••SDS-PAGE凝胶的制备SDS-PAGE电泳凝胶染色和脱色蛋白质分子量的测定 电 泳 •电泳是带电跟粒在电场作用下，向着与其电荷相反的电极移动的现象。•这现象在1808年就发现了，但是作为一项生物化学研究的方法学却是在1937年后，随着电泳仪器等装置的改进才有了较大的进展。然而，电泳真正在生物化学和...
本实验针对上述缺陷,在应用SDS2PAGE法测定正常人红细胞膜蛋白成份中, 主要通过对不同组份染料和不同染色条件加以比较改进,以寻求一种简便、快速、有效的染色法。 1 材料与方法 111 仪器 雷磁225型pH计(上海甘泉五金厂);DY274型电泳仪(北京六一仪器厂);PYX2DHS电热恒温培养箱(上海跃进医疗仪器一厂);Beckman...
[摘要] 目的:比较S DS 2聚丙烯酰胺凝胶电泳(S DS -PAGE )中蛋白染色的3种方法。方法:将S DS 2PAGE 中的蛋白分别用银染、铜染和考马斯亮蓝染色,并对铜染或考马斯亮蓝染色后的蛋白进行相 应的复染。结果:快速银染法灵敏度最高,但操作步骤繁琐,染色时间约50min ;考马斯亮蓝染色灵 敏度最低,需染色和...
1. SDS-PAGE电泳完成后,取出凝胶,去离子水漂洗1次。 2. 取出凝胶到合适的塑料盒中,加入染色液浸没凝胶,室温摇床上染色30min。 3. 观察染色蛋白条带,取出染好色的凝胶,转移到新的塑料盒中,去离子水漂洗至条带清晰后,可以进行观察和拍照。染好色的凝胶可以保存在去离子水中。 4. 使用过的染色液,可以回收使用...
一、SDS-PAGE凝胶电泳原理 SDS-PAGE凝胶电泳是将蛋白样品加入样品处理液(SDS和巯基乙醇)中,并进行高温加热处理,使蛋白变性,多肽链内部和肽链之间的二硫键打开,使肽链呈现开放状态。打开的肽链通过疏水作用与SDS结合,带有负电荷,在电场的作用下向正极迁移。由于不同大小的肽链在迁移过程中受到的阻力不同,它们逐渐分离...