1、首先sdspage结束后，每块凝胶加入100毫升去离子水，微波加热30秒，水平摇床震荡漂洗5分钟，重复三次。2、然后每块凝胶加25毫升染色液，微波加热15秒，水平摇床震荡。3、最后蛋白条带会在10分钟开始逐渐显现，在1小时内达到百分之90染色效果。
1. 电泳结束后取出凝胶，放置容器中倒入染色液以覆盖凝胶为宜，一般30ml即可。2. 放置摇床染色2-10分钟即可。染液呈酸性，请勿徒手触碰染液，如蛋白量较低，胶过厚，可适当延长染色时间。染液可重复利用3次，随着使用次数的增加，染色速度会下降，但不影响灵敏度。3.染色结束后，无需脱色液洗脱，只需将蛋白凝胶放...
SDS-PAGE电泳是一种将蛋白质分离并确定分子量的方法。 首先,将要检测的蛋白质样品加入含有丙烯酰胺的聚丙烯酰胺凝胶中。接着,在凝胶开始聚合的过程中,添加SDS(十二烷基硫酸钠)和β-巯基乙醇,用于使蛋白质带负电荷和还原二硫键。 凝胶结束后,将凝胶放入电泳缸中,加入电泳缓冲液,使用电场将带负电荷的蛋白质分离。较...
PAGE),简称SDS电泳[1],主要用于蛋白质亚基分子量测定。SDS凝胶电泳是定量、比较和识别蛋白质的常用方法。具有经济、速度、重复的特点。它可以根据蛋白质的分子量来分离。 在现在的蛋白染色方法中,考马斯亮蓝染色法是最为常用的[2],虽然这种方法染色时间较长,但是其染色效果好,又比较简便,且银染法染色虽然灵敏度很...
当凝胶电泳结束后,将凝胶拆下放入一容器内,加入考马斯亮蓝染色剂对SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品进行染色,染色时间约30分钟—60分钟,染色结束后更换考马斯亮蓝脱色剂,需20—60分钟,期间许更换2次脱色液直至背景清楚。 脱色完毕后可浸泡在水中,如长期保存可对凝胶进行拍照或将凝胶干燥成胶片。 注意事项: 本...
从电泳装置上卸下玻璃板，用卡片剥下凝胶后切除一角以标注凝胶方位（或将Marker孔设置在前面）。6．染色 将凝胶冲洗后浸泡在染色液中，置于摇床上37℃染色2h或者室温染色过夜（快速染色可用微波炉煮沸后静置10min，2-3次重复），染色液可回收重复利用。7．脱色 染色结束后，将凝胶漂洗后浸泡在脱色液中，置于摇床上...
SDS-PAGE 通常由浓凝胶和稀凝胶两部分组成。浓凝胶主要用于分离蛋白质,稀凝胶则用于集中蛋白质。 3.装载样品并进行电泳 将处理过的样品加入到凝胶的样品孔中,然后施加电压。蛋白质将在电场的作用下从阴极向阳极迁移。 4.染色和显影 电泳结束后,将凝胶染色并洗脱多余的染料,以便观察和分析分离的蛋白质条带。
1.SDS-PAGE电泳见上个实验 2.电转 ⑴剪NC膜大小、滤纸与凝胶板一致,浸泡在转移缓冲液中5min。 ⑵在转移装置中依次将三层滤纸、凝胶、滤纸、三层滤纸放在一起。 ⑶将装好的转移装置放入电转移槽中NC膜一侧向正极,凝胶一面向负极。 ⑷接通电源电压63V,电流90mA,转移过夜。
操作方法 (一)仪器安装 配制连续SDS—PAGE 10%PAA，制胶后，加入含0.1%SDS的PH7.2 0.1mol/L磷酸盐电极缓冲液。(二)加样 加样量分别为2.5µl，5µl，8µl，10µl。每一量级的样品上列顺序加入相应的样品凹槽内。(三)电泳条件 开始时30 mA，样品进胶后改为50—60 mA。电泳结束后，取出凝...
1.学习SDS-PAGE测定蛋白质分子量的原理。 2.掌握垂直板电泳的操作方法。 3.运用SDS-PAGE测定蛋白质分子量及染色鉴定。 二.实验原理 带电质点在电场中向带有异相电荷的电极移动,这种现象称为电泳。 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr)单体和少量交联剂甲叉双丙烯酰胺(简称Bis)通过化学催化剂(过硫酸铵),四甲基...