🎨 染色方法大比拼 溴酚蓝溶液:将0.05g溴酚蓝溶于1ml乙醇,得到5%溴酚蓝溶液。将分离胶AB液按1:1混合后,加入溴酚蓝,其他步骤正常进行。 优点:便宜易得,自制loading buffer的实验室都有溴酚蓝,不需要额外购买商品,上样清晰可见。 缺点:溴酚蓝在上层胶中会晕染渗开,形成蓝色模糊感;在电泳过程中会迁移。 超...
PAGE),简称SDS电泳[1],主要用于蛋白质亚基分子量测定。SDS凝胶电泳是定量、比较和识别蛋白质的常用方法。具有经济、速度、重复的特点。它可以根据蛋白质的分子量来分离。 在现在的蛋白染色方法中,考马斯亮蓝染色法是最为常用的[2],虽然这种方法染色时间较长,但是其染色效果好,又比较简便,且银染法染色虽然灵敏度很...
1. SDS-PAGE电泳完成后,取出凝胶,去离子水漂洗1次。 2. 取出凝胶到合适的塑料盒中,加入染色液浸没凝胶,室温摇床上染色30min。 3. 观察染色蛋白条带,取出染好色的凝胶,转移到新的塑料盒中,去离子水漂洗至条带清晰后,可以进行观察和拍照。染好色的凝胶可以保存在去离子水中。 4. 使用过的染色液,可以回收使用...
银染染色试剂及步骤 步骤 试剂 时间 备注 固定液 50%乙醇+12%醋酸+0.1%甲醛+38%H2O 20 min 漂洗液 50%乙醇 3 min 引发液 0.02%Na2S2O3 1 min 清洗 H2O 3次/min 染色 0.5%AgNO3+0.075%甲醛 2~5 min 清洗 H2O 3次/min 显色 2.5%Na2CO3+0.05%甲醛 至显色 终止 1%乙酸 注:染色液的配制方法,40 mL...
使用方法: 1、 将电泳后的 PAGE 胶取下放入塑料容器中,加入适量染色液(以刚刚覆盖过胶面为适)。 2、 摇床上常温摇动10-20分钟。 3、 观察结果。 特点 · 1.室温下10min内可显现蛋白条带,无需脱色。 · 2.无毒无刺激气味。 · 3.灵敏度高,ng级蛋白,条带清晰。 注意事项: 1、常规染色所需的漂洗...
(一)SDS-PAGE贮液 1. 胶母液:丙烯酰胺29.2g,甲叉双丙烯酰胺0.8g,水溶至100ml,4°C保存。 2. 分离胶缓冲液(4´):1.5M Tris-HCl,0.4%SDS,pH8.8,室温保存。 配制:90.855gTris,20ml 10%SDS,加水至500ml。 3. 浓缩胶缓冲液(4´):0.5M Tris-HCl,0.4%S...
PAGE胶主要分成两个作用,一个是分离胶的作用,另一个是浓缩胶的作用。 浓缩胶的作用:样品和浓缩胶中的氯离子形成的界面泳动,成为先导界面,甘氨酸分子组成的尾随界面。在移动界面的两个边界之间,是一个电导较低,而电位梯度较陡的区域,他可以推动样品的蛋白质前移之分离胶的前沿。
SDS-PAGE电泳操作流程—含考染银染碘染.docx,1 SDS- 操作流程——考染 1、预备溶液 30% 30%聚丙烯酰胺溶液 30%〔w/v〕Acrylamide 【组分浓度】 各种组分名称 各种组分名称 30%Acr-Bis(29:1) 29%Acrylamide( 丙烯酰胺) 1%BIS(N,N’-亚甲丙烯酰 胺) 配制不同体积所需各成分的
SDS-PAGE快速染色脱色方法 在用SDS-凝胶电泳法测定蛋白质分子量时，应注意以下几个问题：1．如果蛋白质-SDS复合物不能达到1.4克SDS/1克蛋白质的比率并具有相同的构象，就不能得到准确的结果。影响蛋白质和SDS结合的因素主要有以下3个：（1）二硫键是否完全被还原：只有在蛋白质分子内的二硫键被彻底还原的情况...