解决方案:进行样品预处理,如离心或过滤,去除高分子量物质或聚集体,提高凝胶浓度或缩短电泳时间。🌊 电泳条带出现弥散 可能原因:凝胶制备不均匀,电泳缓冲液离子强度过高或过低。 解决方案:确保凝胶制备均匀,检查电泳缓冲液的离子强度,并进行适当调整。🔄 电泳条带出现偏移 可能原因:电泳缓冲液pH值不合适,凝胶边缘效应。
样品中的盐含量过高:高盐会影响电泳,导致蛋白迁移异常。 SDS浓度过低:SDS是蛋白质变性的关键,低浓度SDS会导致蛋白质保持天然构象,影响迁移。 解决办法: 检查凝胶配方:确保分离胶和堆积胶的浓度正确。堆积胶一般为4-5%,分离胶根据蛋白分子量不同,通常为8-15%。 透析样品或去除盐分:可以通过透析或超滤去除样品中的...
②出现“皱眉”形带(两边向下中间鼓起) 主要出现在蛋白质垂直电泳槽中,一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净 可在两板间加入适量缓冲液,以排除气泡 ③带出现拖尾 样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起 加样前离心;选择适当的样品缓冲液,加适量样品促溶剂;电泳缓冲液时间过长,重新配制;降低凝胶浓度 ④带出现纹...
在SDS-PAGE电泳过程中，有时我们会遇到条带拖尾和弥散的问题。这可能是由于样品处理不当或电泳条件不合适导致的。为了解决这些问题，我们需要仔细检查样品的处理过程，确保其符合要求，并调整电泳条件，如电压、电流和时间等，以获得更好的电泳效果。可能的原因：样品降解：蛋白质在制备过程中受到损伤，导致其分子量降低...
SDS-PAGE电泳的常见问题解析(FAQ) 活性蛋白整体方案SDS-PAGE电泳的常见问题解析(FAQ) 1.关于凝胶的一些问题 1.胶的凝结不好,例如有花纹特别是浓度高的胶在冬天温度较低的情况下,在分离胶的下部有波浪样的花纹,凝 胶不均匀。解决方法:加大TEMED和过硫酸胺的量,使其凝结速度加快。同时洗干净玻璃板,防止有残留的...
在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH 环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于...
3、非还原SDS处理:生理体液、血清、尿素等样品,一般来说只用1%SDS,沸水中煮3分钟,不加还原剂,因而蛋白折叠没有被破坏,不用来测定分子量。 5、SDS-PAGE电泳凝胶中各主要成分分别有什么作用? 1.制胶缓冲液:浓缩胶选择pH6.7,分离胶选择pH8.9,选择tris-HCL系统 ...
🧬 Q: SDS-PAGE电泳的基本原理是什么? A: SDS-PAGE利用SDS分子与蛋白质结合,使蛋白质带负电。蛋白质-SDS复合物在凝胶中根据分子量大小分离。蛋白质的迁移率与其分子量成正比。🧪 Q: 缓冲液系统对电泳有何影响? A: 制备凝胶时使用Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶pH为6.7,分离胶pH为8.9。在浓缩胶的弱酸性环境下...
SDS-PAGE是测定未知蛋白质分子量的主要方法。同时对分子量已知的蛋白质和未知样品进行电泳。染色后，根据标准蛋白的相对迁移率和分子量的对数，得到一条线，利用其相对迁移率确定未知样品的分子量。在实验室中，用一种与染料共价偶联的标准分子量蛋白质作为参考蛋白质，粗略地指示未知蛋白质的大小。这种预染色的蛋白质...
SDS-PAGE问题及解决方法一:电泳跑的太慢 A.内槽缓冲液要没过凹玻璃板,低于平玻璃板。内槽和外槽缓冲液不能相通。B.电泳缓冲液pH值及浓度是否配制正确。C.分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液pH值及浓度是否配制正确。D.电压太低,选择合适的电压。E.样品盐浓度太大,除去样品中的盐。 二:微笑现象 .电泳温度太高...