可能原因:电泳缓冲液pH值不合适,凝胶边缘效应。 解决方案:调整电泳缓冲液的pH值,确保凝胶制备均匀,避免边缘效应。⚡ 电泳过程中电流不稳定 可能原因:电泳槽连接不良,凝胶中存在气泡。 解决方案:检查电泳槽连接是否良好,排除凝胶中的气泡。💧 电泳过程中出现样品溢出 可能原因:样品加入量过多,凝胶孔径不合适。 解决...
2.严谨操作:SDS-PAGE测定分子量有误差,不可完全信任。有必要时,应同时作标准曲线。并且SDS—PAGE测定分子量有10%误差,不可完全信任。 3.注意个人安全:在实验过程中请注意个人安全,避免直接接触化学试剂。 以上就是用SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质含量的注意事项,如果您对实验步骤有疑问或者想了解更多信息...
注意:SDS-PAGE电泳关键在于胶是否制得均匀平整,当然这跟灌胶用的模具和方法有一定关系。加入TEMED和过硫酸铵后丙烯酰胺开始聚合,但是过硫酸铵易被氧化,所以操作要迅速,而且最后要液封,保证模具内不漏气才能使胶聚合的很好。同时不要把制胶用的玻璃板中间压太紧,这样会使中间的胶偏薄,水封时要小心加入水不要剧烈扰...
避免过热:确保电泳槽有足够的散热和冷却。 5.染色和去染: 使用合适的染色方法,例如考马斯亮蓝、银染或其他特定的染色方法。 若使用背景去染步骤,注意避免过度去染。 6.分析: 使用适当的软件或工具来分析蛋白质条带的位置。 使用分子量标记来生成一个标准曲线,从而计算目标蛋白的分子量。
凝胶凝结问题 在SDS-PAGE电泳中，我们常常会遇到凝胶凝结速度过慢或无法凝固的情况。这通常与引发聚合反应的试剂——TEMED和APS的状态有关。如果这两种试剂的用量不足或已失效，那么凝胶的凝固过程就会受到影响。值得注意的是，APS（过硫酸铵）由于其不稳定性，容易在长时间暴露于空气中后分解失效，因此每次使用时都...
问题表现: 电泳后,蛋白条带不直,呈现弯曲状或波浪状。 可能原因: 凝胶制备不均匀:凝胶厚度不均匀,导致电场分布不均,影响条带走向。 电泳时加热不均:电泳过程中产生的热量使得凝胶不同部分加热不均匀,导致蛋白迁移速率不同。 电压过高:高电压容易引起凝胶升温,导致条带弯曲。
值得注意的是，APS（过硫酸铵）由于其不稳定性，容易在空气中分解而失效，因此在使用前需现配现用。同时，TEMED也对保存条件敏感，需避光并置于4℃冰箱中保存，以防其氧化变黄、失去活性。条带拖尾和弥散问题 在SDS-PAGE电泳结束后，有时会观察到条带出现拖尾和弥散现象。这可能是由于样品中蛋白质的分子量接近...
12.丙烯酰胺是有毒的,操作时注意安全。(凝胶以后,聚丙烯酰胺毒性降低。) 13.1.5mm的玻璃板有黑色条带封低,1mm勺玻璃板用白色条带封底。(封紧以防 漏胶) 14.凝胶的时间要严格控制好,一般在20-30min。 15.样品处理时,沸水浴使蛋白充分变性以防在电泳时产热蛋白质降解。一般要 5-10分钟。而且要注意把样品的...
🔍 配制SDS-PAGE凝胶时,务必关注以下几点:1️⃣ 试剂有效期与清澈度:定期检查配胶试剂,一旦发现沉淀或结晶,请立即更换。2️⃣ pH选择与浓度:根据实验需求,谨慎选择pH8.8或pH6.8的Tris-HCl,并注意1.0M与1.5M的浓度差异。3️⃣ 储存与保护:4℃下保存的10%SDS易结晶,需小心使用。30%丙烯酰胺应避光且...