转染:电泳结束后,用刮板小心刮取胶,放入大培养皿中,加入转染液,染色10-15分钟(根据考马斯亮蓝新旧定)。 脱色:回收转染液,再次沸水浴脱色30分钟,或用脱色液,直至条带显出。 结果观察 观察条带:脱色完成后即可观察结果。 通过以上步骤,你可以利用SDS-PAGE电泳方法分离和纯化蛋白质,为后续实验提供基础数据。 0 0 ...
估测蛋白质分子量的大小：通过SDS-PAGE电泳，可以大致估算出蛋白质的分子量范围。估算蛋白质的纯度：电泳后，根据蛋白质条带的清晰度和分离程度，可以初步判断蛋白质的纯度。分析多肽亚基的大小和肽图分析：SDS-PAGE电泳还可用于深入研究多肽亚基的结构和肽图特征。总之，SDS-PAGE电泳是科研和生物药领域不可或缺的技...
电泳时间一般4～5小时,电压为40V较好,也可用60V。电泳至溴酚兰刚跑出即可终止电泳,进行转膜。0 0 发表评论 发表 作者最近动态 Ms呆呆酱 2024-12-14 参加游学前,你需要知道的5个关键点!✨...全文 Ms呆呆酱 2024-12-14 🎻 钢琴琴弦断裂的六大原因及预防措施 🎻...全文 Ms呆呆酱 2024-12-14 DIY...
电泳时间通常为1-2小时,取决于凝胶大小和蛋白质分子量。 四、染色与脱色 染色 电泳结束后,小心取出凝胶,放入考马斯亮蓝染色液中,染色30-60分钟(根据需要调整时间)。 脱色 将凝胶转移到脱色液中,轻轻摇动脱色,直到蛋白条带清晰可见(通常需要2-3次更换脱色液,持续几小时到过夜)。
4、卸胶：等胶内的所有的蓝色都跑出去，电泳停止，一般时间为1-2小时左右。把胶板从电泳仪上卸下，用刀片把胶板撬开，胶的浓缩胶部分割除；5、染色：放入考马斯亮蓝R-250染色液中进行常温过夜染色；5、脱色：将过夜染色的SDS-PAGE胶放入脱色液中进行脱色，直到背景发白。相关试剂配置说明一、3×SDS-PAGE ...
聚合时间由AP和TEMED决定,通常在30分钟左右。AP不新鲜会导致聚合变慢,气温较低时胶凝得慢一些,必要时可适当增加AP和TEMED的量,但通常不会超过1小时。若超过1小时甚至更长仍未聚合,应检查配制的操作有无错误。 配制浓缩胶:按照说明书配积层胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳子插入浓缩...
浓缩胶一般用稳压80-100V,如果使用新鲜的缓冲液,这时的电流应该在20mA左右,如果电流太小,请检查缓冲液以及电泳设备是否有问题。当指示前沿至浓缩胶和分离胶交界时,电压可以调高到120-150V。整个电泳时间约需2-3小时。 4.关于电泳的指示前沿: 由于溴酚蓝在Tricine-SDS-PAGE系统中泳动很快,很快就跑到缓冲液中去了...
根据实际情况调整电泳时间,直到蓝色标准线跑到最下面。 🧼 染色:电泳结束后,切胶并进行染色。参考相关染色说明书,使用双蒸水或去离子水加热沸腾后,在摇床上摇动5分钟,弃水。 🌈 快速染色:加入20μL~25μL快速染色液(浸没胶面即可),加热沸腾保持30~60秒,在摇床上摇动5~10分钟,弃去染色液。