电泳过程要观察电流变化,避免电压设置过高导致凝胶过热或蛋白质变性。 电泳时保持系统的冷却,尤其是分子量较大的蛋白,电泳时间较长时建议使用冷却系统。 染色和脱色时间控制适当,避免蛋白条带过淡或背景染色过深。 总结 SDS-PAGE是一种高效的蛋白质分离技术,经过仔细操作和调整,能得到清晰的蛋白质分离效果。这一详细...
凝胶的时间要严格控制好,一般在20-30min。 点样时,如果孔比较多,尽量点在中央。(点在边上时,跑出的带是斜的) 点样前要排尽胶底部的气泡,防止干扰电泳。 电泳结束后,取胶时,小心把玻璃板翘起(防止再次落下)。 脱色时,尽量多次进行换水。 上样量不宜太高,蛋白含量每个孔...
将凝固的胶板装入电泳槽内，并在电泳槽内加入SDS-PAGE电泳缓冲液，把胶浸泡一段时间，时间越长越好（防止梳子与胶相连，或胶因湿度不够而萎缩）；（6）点样时，再把梳子拔出来，拔时动作要轻，防止胶齿被拔断。二、SDS-PAGE电泳1、调胶：拔掉SDS胶上的梳子，并用小针调整齿的位置（使它们都平行）。2、点...
聚合时间由AP和TEMED决定,通常在30分钟左右。AP不新鲜会导致聚合变慢,气温较低时胶凝得慢一些,必要时可适当增加AP和TEMED的量,但通常不会超过1小时。若超过1小时甚至更长仍未聚合,应检查配制的操作有无错误。 配制浓缩胶:按照说明书配积层胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳子插入浓缩...
3. 电泳结束:电泳时间一般为1-3小时。当待测蛋白质和标准蛋白质迁移距离接近或超出凝胶长度时,停止电泳。然后可以使用染色剂(如Coomassie Brilliant Blue)将蛋白质染色,或者将凝胶转移到膜上,进行进一步的免疫检测。 四、结果分析: SDS-电泳结束后,可以通过可视化染色观察凝胶中的蛋白质条带。蛋白质迁移速率与对数分...
聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE) 是分离蛋白质的常用方法,样品的蛋白质分子热变性解聚后与 SDS 结合形成带负电的蛋白质-SDS 复合物,复合物在电泳中的迁移率取决于蛋白质的分子大小,使用均匀浓度的 SDS- PAGE 来分析分子量在 15~ 200kDa 的蛋白质时,电泳迁移率与分子量的对数成线性关系,但分离分子量小于 10kDa...
SDS-PAGE即十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳，是一种间断的电泳系统，通常用于分离分子量在5—250kDa之间的蛋白质。十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate ，SDS）和聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel ，PAG）组合使用可以消除结构和电荷的影响，从而仅根据分子量的差异来分离蛋白质。SDS-PAGE的特性：在一定浓度时，...
14.凝胶的时间要严格控制好,一般在20-30min。 15.样品处理时,沸水浴使蛋白充分变性以防在电泳时产热蛋白质降解。一般要 5-10分钟。而且要注意把样品的管口封好,以防沸水浴时冲开(出错了)。 16.点样时,如果孔比较多,尽量点在中央。(点在边上时,跑出的带是斜的) 17.点样前要排尽胶底部的气泡,防止干扰...