(7) 割胶和染色：取下制胶板，用割胶板割下所需的凝胶部分，并将其放入染色槽中进行染色。染色时间大约需要20-30分钟。染色过程中可适当加热以提高染色效果。必须进行染色处理的原因是：溴酚蓝染料分子量较小在电泳时移动速度快，而蛋白质分子量大移动慢，通过染色可以清晰地观察到蛋白质条带的变化。若使用回收的...
通常凝胶制备需要1～1.5小时,电泳在25～30mA下通常需要3小时,染色2～3小时,过夜脱色。通常使用的垂直平板电泳可以同时进行多个样品的电泳。 Ornstein和Davis设计的高pH碱性不连续系统,有其独特的特点。根据Henderson-Hasselbalch公式: 式中的“α”是缓冲液中各种分子的离解度。由上式可以看出:① 浓缩胶的pH(6.8)小...
电泳仪与电源 考马斯亮蓝染色液(或其他染色液) 实验步骤 一、制备SDS-PAGE凝胶 准备分离胶和浓缩胶按照不同的蛋白质大小,选择合适的分离胶浓度(常见为10-15%)。具体配方如下:分离胶(Resolving Gel)配方: 水 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(Acrylamide-Bis solution) 1.5 M Tris-HCl (pH 8.8) 10% SDS 10% ...
染色(20min) 脱色(30min~2h) 分析 SDS-PAGE蛋白凝胶电泳 实验过程 1.装配装置 BG-verMINI型迷你垂直电泳槽 (北京百晶) SDS-PAGE蛋白凝胶电泳 实验过程 2.凝胶配制 *Acr有神经毒 性 下胶(分离胶)10% 上胶(浓缩胶)5% H2O 30%Acr-Bis 3.9ml 3.3ml 3.4ml 0.83ml Buffer (含SDS) 10%APS TEMED (1.5M ...
凝胶的时间要严格控制好,一般在20-30min。 点样时,如果孔比较多,尽量点在中央。(点在边上时,跑出的带是斜的) 点样前要排尽胶底部的气泡,防止干扰电泳。 电泳结束后,取胶时,小心把玻璃板翘起(防止再次落下)。 脱色时,尽量多次进行换水。 上样量不宜太高,蛋白含量每个孔...
染色液具有极高的灵敏度,过夜染色时,检测上限可达10ng。不含甲醇和乙酸等有毒或挥发成分,保证操作者的健康。且完全适用于质谱检测,不会对蛋白产生甲基化和乙酰化。 蛋白胶快速染色液主要应用于SDS-PAGE凝胶电泳:是对蛋白进行定性及半定量分析的最常用,最快速方便的技术。根据蛋白分子量的不同,将蛋白梯度分离。蛋白...
7.加样电泳（每孔加样15μl）。8.卸下玻板，剥离凝胶放在器皿内，切去一角作为方位标记。9.染色：用至少五倍体积染色液浸泡凝胶，于平缓摇摆平台上室温1h左右。10.脱色：用蒸馏水漂洗数次，再用脱色液脱色，至蛋白质条带清晰 注意事项 （1）聚丙烯酰胺具有神经毒性，操作时要戴手套。（2）安装电泳槽时要注意...
待溴酚蓝标记移动到凝胶底部时,关电源,把电泳缓冲液倒回瓶中。2.2.5 剥离胶 把电泳槽取出,两块板拿下来,用刮片从长短玻片中间翘起,取下。2.3 染色放于加有R250染色液的染色皿中,染液漫过胶即可,置于摇床上,转 15、速约为45r/min,时间约1小时,完成后染液倒掉并用水洗掉染液。2.4 .脱色取出染色过的胶放于...
SDS-PAGE蛋白电泳检测编号: 7.5染色脱色:(根据具体需要,选择9.5.1或9.5.2) 7.5.1考马氏亮蓝法 7.5.1.1染色:将电泳后的凝胶取下,浸入染色液中,微波炉加热1min避免沸腾,在摇床上染色45min左右;时间可根据染液配制的时间稍加长短; 7.5.1.2、脱色:将凝胶自染色液中取出,浸入脱色液中,微波炉加热1min避免沸腾,直至...