凝胶凝结问题 在SDS-PAGE电泳中，凝胶的凝结是一个至关重要的步骤。通常，凝胶的凝固时间应控制在30分钟至1小时以内。若发现凝胶凝结速度过慢或根本无法凝固，这可能与引发聚合反应的试剂——TEMED和APS的状态有关。这两种试剂的用量不足或失效，都会导致凝胶凝固缓慢或失败。值得注意的是，APS（过硫酸铵）由于其不...
在 SDS-PAGE 不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是 Tris-HCL 缓冲系统,浓缩胶 是 pH6.7,分离胶 pH8.9;而电泳缓冲液使用的 Tris-甘氨酸缓冲系统.在浓缩胶中,其 pH 环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而 CL 离子却很高, 两者之间形成导电性较低的区带, 蛋白分子就介于二者之间泳动...
在SDS-PAGE电泳过程中，有时我们会遇到条带拖尾和弥散的问题。这可能是由于样品处理不当或电泳条件不合适导致的。为了解决这些问题，我们需要仔细检查样品的处理过程，确保其符合要求，并调整电泳条件，如电压、电流和时间等，以获得更好的电泳效果。可能的原因：样品降解：蛋白质在制备过程中受到损伤，导致其分子量降低...
可能原因:样品浓度过高或过低,凝胶浓度不合适,电泳条件不合适。 解决方案:调整样品浓度,选择合适的凝胶浓度,并优化电泳条件,如电压、时间和温度。🌬️ 电泳条带出现拖尾 可能原因:样品中存在高分子量物质或聚集体,凝胶浓度过低,电泳时间过长。 解决方案:进行样品预处理,如离心或过滤,去除高分子量物质或聚集体,提...
SDS-PAGE常见问题与解决方法 一.凝胶问题 1. 胶的凝结不好,例如有花纹特别是浓度高的胶在冬天温度较低的情况下,在分离胶的下部有波浪样的花纹,凝胶不均匀。 解决方法:加大TEMED 和过硫酸胺的量,使其凝结速度加快。同时洗干净玻璃板,防止有残留的胶干结在玻璃板上。 2. 胶不凝, 解决方法:温度较低时加大TEMED...
SDS PAGE 电泳 常见问题分析 1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响 在 SDS PAGE 不连续电泳中 制胶缓冲液使用的是 Tris HCL 缓冲系统 浓缩胶是 pH6.7 分离胶 pH8.9 而电泳缓冲液使用的 Tris 甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中 其 pH 环境呈弱酸性 因此甘氨酸解离很少 其在电场的作用下 泳动效率低 而 CL 离子却很高 ...
SDS-PAGE常见问题与解决方法 一.凝胶问题 1. 胶的凝结不好，例如有花纹特别是浓度高的胶在冬天温度较低的情况下，在分离胶的下部有波浪样的花纹，凝胶不均匀。解决方法：加大TEMED 和过硫酸胺的量，使其凝结速度加快。同时洗干净玻璃板，防止有残留的胶干结在玻璃板上。2. 胶不凝，解决方法：温度较低时加大...
SDS-PAGE电泳是一种利用聚丙烯酰胺凝胶的分子筛效应来分离蛋白质和核酸的技术。它通过SDS(十二烷基硫酸钠)的作用,将蛋白质解离成单个多肽亚基,从而根据亚基分子量的大小进行分离。📚 几乎所有的蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行,确保蛋白质解离成单个多肽亚基并尽可能减少其相互间的聚集,常用的就是SDS-PAGE电泳...
PAGE可以根据蛋白质分子的电荷和分子量不同而引起的迁移率不同，将蛋白质分成若干条带。SDS是一种阴离子表面活性剂，它可以在还原剂DTT存在下破坏蛋白质的氢键和疏水键，并与蛋白质分子按一定比例结合形成短棒状复合物。相同的密度，与蛋白质的分子量呈正相关，不同分子量的蛋白质所形成的复合物的长度是不同的。SD...