SDS-PAGE问题及解决方法一:电泳跑的太慢 A.内槽缓冲液要没过凹玻璃板,低于平玻璃板。内槽和外槽缓冲液不能相通。B.电泳缓冲液pH值及浓度是否配制正确。C.分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液pH值及浓度是否配制正确。D.电压太低,选择合适的电压。E.样品盐浓度太大,除去样品中的盐。 二:微笑现象 .电泳温度太高...
SDS-PAGE常见问题与解决方法 SDS-PAGE常见问题与解决方法 一.凝胶问题 1. 胶的凝结不好,例如有花纹特别是浓度高的胶在冬天温度较低的情况下,在分离胶的下部有波浪样的花纹,凝胶不均匀。 解决方法:加大TEMED 和过硫酸胺的量,使其凝结速度加快。同时洗干净玻璃板,防止有残留的胶干结在玻璃板上。 2. 胶不凝, ...
增加还原剂浓度:确保样品缓冲液中含有足够的还原剂(例如0.1-0.2M DTT或β-巯基乙醇)。 这些是SDS-PAGE电泳实验中常见的问题及其解决方法。每个实验中的具体问题可能会因设备、操作或样品不同而有所差异,仔细排查各个步骤是解决问题的关键。
SDS-PAGE常见问题与解决方法 SDS-PAGE常见问题与解决方法 一.凝胶问题 1. 胶的凝结不好，例如有花纹特别是浓度高的胶在冬天温度较低的情况下，在分离胶的下部有波浪样的花纹，凝胶不均匀。解决方法：加大TEMED 和过硫酸胺的量，使其凝结速度加快。同时洗干净玻璃板，防止有残留的胶干结在玻璃板上。2. 胶不凝，...
当样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。所以，pH对整个反应体系的影响是至关重要的，实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况，应首要考虑该因素。2....
关于SDS-PAGE凝胶电泳的常见问题？电泳是分离蛋白质和其他物质如核酸、嘌呤、嘧啶、一些有机化合物甚至无机离子的主要技术。目前的大部分电泳是将样品分离到固定介质中的流动相中。聚丙烯酰胺凝胶是主要介质之一。它是一种多孔凝胶，其孔径接近蛋白质分子的大小，提高了蛋白质的分辨率。此外，聚丙烯酰胺凝胶化学稳定性好，...
SDS-PAGE常见问题与解决方法 一.凝胶问题 1. 胶的凝结不好,例如有花纹特别是浓度高的胶在冬天温度较低的情况下,在分离胶的下部有波浪样的花纹,凝胶不均匀。 解决方法:加大TEMED 和过硫酸胺的量,使其凝结速度加快。同时洗干净玻璃板,防止有残留的胶干结在玻璃板上。 2. 胶不凝, 解决方法:温度较低时加大TEMED...
1)原因一:上样浓度问题 样本重度挂孔、拖尾、弥散,首先考虑上样浓度问题,浓度太高80%会出现样本挂孔拖尾现象,样本沉淀在加样孔上。对于诱导表达后的菌液来说,OD值一般都会大于2.0,直接菌液离心重悬煮样上SDS,就会出现挂孔现象,挂空滤百分百,在加样的时候也会看出来,样本是一小坨掉入孔底,而不是很顺滑的流入...
解答了在进行SDS-PAGE时结果不是一条直线的可能原因,包括样品加载量、样品预处理、胶液配制和电泳条件等方面.
A:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠),SDS会与变性的多肽,并使蛋白带负电荷,由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关,因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关,在达到饱和的状态...