追求更快速、更灵敏且操作更为简便的RT-qPCR分子诊断试剂已成为当前的主要发展趋势。作为RT-qPCR过程中的关键原料之一,逆转录酶需要具备更快的逆转录速度、更高的合成产量以及更好的耐热性能。为了获得更适用于RT-qPCR的逆转录酶,翌圣生物在M-MLV的基础上通过基因改造,开发出RNase H活性更低,热稳定性更高,持续合成
逆转录(Reverse Transcription)是以RNA为模板,在逆转录酶的催化作用下,合成RNA/DNA杂合双链,然后水解杂合双链中的RNA,得到互补的单链cDNA的过程。得到的cDNA单链可以作为扩增模板,合成双链DNA。cDNA的合成可以用于后续的PCR实验、qPCR实验、基因检测、基因工程...
在逆转录过程中必不可少的逆转录酶,除了其依赖RNA的DNA聚合酶活性,还需要镁离子或锰离子等辅助因子,同时包括依赖于DNA的DNA聚合酶活性和RNase H活性,它可以降解DNA与RNA杂交链中的RNA链。与典型的DNA聚合酶不同,逆转录酶缺乏校对功能,在PCR实验中逆转录酶存在抑制Taq聚合酶活性的功能,进而导致不准确的测定结果。
Hifair® Lyo Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以 RNA 为模板进行多重定量 PCR 反应的预混液。在实验的过程中,逆转录和定量 PCR 在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。独特的 Buffer和酶的设计,可用于一步法 RT-qPCR 冻干反应体系的配制和产品设计。 本试剂利用耐热 Hifair® V Reverse ...
稀释方法:将逆转录得到的cDNA吸出10μl用90μl DEPC水1:10稀释到100μl,相当于稀释10倍。 实时荧光定量多聚核苷酸链式(Real-time Quantitative polymerase chain reaction)RT-qPCRSYBR Green法 准备:96孔板、封板膜、板架、SYBR Green、DEPC水、实验所需Primer、逆转录得到的cDNA。(10μl体系) ...
RT-qPCR master mix:用于双标记探针的冻干RT实时PCR Master Mix;分子生物学。 艾美捷RT-qPCR master mix(PCR-159S)含有SCRIPT逆转录酶、HotStart聚合酶Ab+、dNTP、反应缓冲液、MgCl2和稳定剂。PCR级水 RT-qPCR master mix检测准备: 1. RNA/引物混合液的准备 ...
定量逆转录-聚合酶链反应（RT-qPCR ）一、实验原理 逆转录 -聚合酶链反应 (Quantitative Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction ，RT-qPCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA ，以其中的mRNA 作为模板，采用Oligo （dT ）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA ，再以cDNA 为模板进行PCR 扩增，而获得目的...
逆转录qPCR预混液应用 Magigen一步法RT-qPCR预混液试剂整合了 Real Time RT-PCR 的反转录酶(MMLV Reverse Transciptase ) 和抗体修饰的热启动酶 ( Hotstart Taq DNA Polymerase),配合经过优化的缓冲体系,使用基因特异性引物(GSP)在单管中完成逆转录和 qPCR 反应,不需要额外的开管/移液操作,不需要额外的操作,...
本RT-qPCR是一步法逆转录qPCR产品,能够便捷的在同一个反应管内完成逆转录反应和PCR扩增反应。反应过程中无需打开管盖添加试剂,避免了污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。 【产品优势】 简单快捷:单管操作,方便易用; 抗干扰能力强:可用于免提取样本扩增; ...
反转录PCR是指以mRNA为模板，在反转录酶的作用下合成cDNA。通常使用禽成髓细胞性白血病病毒或莫洛尼鼠白血病病毒的反转录酶。在20μl体系中，加入Oligo(dT)、dNTP、逆转录酶、RNase抑制剂和buffer，进行反转录。（4）RT-qPCR：提取总RNA，使用Oligo(dT)结合mRNA进行反转录，生成cDNA。将cDNA作为模板进行...