基线（baseline）：是指在PCR扩增反应的最初数个循环里，荧光信号变化不大，接近一条直线，这样的直线即是基线。一般来讲，第3-15个循环的荧光值就是基线。阈值（threshold）：阈值一般是基线的标准偏差的10倍，在实际操作中也可以手动调节，位于指数期就可以。Ct 值（Ct value）：Ct值就是荧光值达到阈值时候的PC...
Ct值是荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数,它与初始模板量成反比。为了更好地理解荧光定量PCR的数学原理,我们需要了解几个关键的动力学参数: 基线期:扩增曲线的水平部分,代表荧光信号明显增强前的背景荧光值。这个值是测量偶然偏差产生的,一般机器默认值为3-15,但需要根据具体情况进行调整。 指数增长期:在这个阶段...
不同基因可单独设置阈值,但同一基因扩增需使用同一阈值。📊 Ct值:与起始浓度对数成线性关系,定量时一般取Ct值在15-35之间。过大或过小可能导致定量不准确。🔍 相对定量:通过与内参基因Ct值之差计算基因表达差异,常用2^-ΔΔCt或考虑扩增效率的Pfaffl法。0 0 发表评论 发表 作者最近动态 文哥英语学习陪跑 202...
RT-qPCR 的 Ct 值偏大主要有两种情况,一种是所有基因 Ct 都偏大,另外一种是个别基因 Ct 偏大。 所有基因 Ct 偏大 如果前期所做基因均已做过预实验,Ct 值正常,而本次实验,所有基因扩增 Ct 值都偏大,那很可能是模板质量的原因,如发生了降解,浓度不纯...
图1.qPCR检测结果△Ct<1,且 Ct 值与 Nanodrop 定量结果无线性关系 因此,cDNA浓度的测定值是不准确的,逆转录实验之后无需测定浓度。RT-qPCR是一个多步骤连贯实验,正是因为cDNA无法鉴定,只能通过后续qPCR实验才能呈现结果。 2 gDNA污染的识别与去除 gDNA的污染主要来源于RNA模板, 那如何识别RNA模板中是否仍含有gDNA...
在荧光定量PCR技术中，有一个很重要的概念--Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。在RT-qPCR中，对扩增过程进行实时监测，根据反应时间和荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。图2：图片来源于网络，若有侵权联系删除 整条曲线可以分为3个阶段：...
从线性方程可以看出，lg(N初始模板量)与Ct值呈负线性关系，即模板拷贝数越多，其Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准样品绘制标准曲线，根据荧光基团发出的荧光强度与PCR 扩增产物的数量呈对应关系，只要对荧光信号进行实时监测并得到未知样品的Ct值，即可通过标准曲线计算未知样品的起始拷贝数。PART 03精品推荐 针对...
Ct 值 (Cycle threshold，循环阈值)，是指 qPCR 反应中荧光信号达到设定阈值时对应的循环数 (一般 Ct 值在 20-30 之间)。扩增曲线 (Amplification curve) 是指随 PCR 反应进行，根据荧光信号强度随着循环数变化而绘制的曲线。正常的扩增曲线 (S 型) 包括四个阶段：基线期、指数增长期、线性增长期、平台期。熔...
qPCR的扩增曲线与荧光阈值交点对应的横坐标就是循环数(Ct)值。Ct值越低证明样本中靶标越多。从qPCR的曲线中可以看出,在基线期,没有明显的荧光信号。随着循环数的增加,荧光信号逐渐增强。在平台期,因酶活降低或dNTP被消耗殆尽,曲线趋于平缓。 图4. qPCR扩增曲线...