Ct 值（Ct value）：Ct值就是荧光值达到阈值时候的PCR循环次数，跟初始模板的量呈反比。下面我们从荧光标记方法、详细实验步骤和常见问题分析三个方面来详细讲解RT-qPCR。图1.基线、标准偏差和荧光阈值示意图 一、荧光标记方法 RT-qPCR是通过检测反应体系中的荧光强度来检测PCR扩增产物的，其荧光标记方法分为两种：...
不同基因可单独设置阈值,但同一基因扩增需使用同一阈值。📊 Ct值:与起始浓度对数成线性关系,定量时一般取Ct值在15-35之间。过大或过小可能导致定量不准确。🔍 相对定量:通过与内参基因Ct值之差计算基因表达差异,常用2^-ΔΔCt或考虑扩增效率的Pfaffl法。0 0 发表评论 发表 作者最近动态 文哥英语学习陪跑 202...
逆转录体系中dNTP 投入量的多少会使cDNA浓度的测定结果产生较大差异,但最终Ct值几乎一致。 表1. Nanodrop定量结果统计表 图1.qPCR检测结果△Ct<1,且 Ct 值与 Nanodrop 定量结果无线性关系 因此,cDNA浓度的测定值是不准确的,逆转录实验之后无需测定浓度。RT-qPCR是一个多步骤连贯实验,正是因为cDNA无法鉴定,只能...
在荧光定量PCR技术中，有一个很重要的概念--Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。在RT-qPCR中，对扩增过程进行实时监测，根据反应时间和荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。图2：图片来源于网络，若有侵权联系删除 整条曲线可以分为3个阶段：...
④ qPCR 反应结束后,以模板系列稀释倍数 log 值为 X 轴,以对应的 Ct 值为 Y 轴(反之亦可),制作标准曲线,如下图。 图3.标准曲线 当扩增效率 E 应在 90～110% 之间(根据E=10-1/斜率–1 公式计算,对应的斜率范围应在 -3.1~-3.58之间),标准曲线 R2...
平台期:在这个阶段,荧光信号达到一个稳定值,扩增效率接近于零。通过分析这些动力学参数,我们可以更准确地理解RT-qPCR的工作原理和数学基础。Ct值的计算是基于这些参数的,它为我们提供了关于初始模板量的重要信息。0 0 发表评论 发表 作者最近动态 一生平安古十悦 2025-02-24 🎨 创意美术:小小蜘蛛的奇妙世界 🕸...
实时定量聚合酶链反应（Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction，简称RT-qPCR）是一种用于检测和定量RNA表达水平的高灵敏度技术。RT-qPCR结果的判读通常遵循以下标准：1.阈值循环（Threshold Cycle，Ct值）：- Ct值是指达到检测阈值时的循环次数，它反映了样本中目标RNA的初始浓度。- Ct值越低，表示目标RNA...
Ct 值 (Cycle threshold，循环阈值)，是指 qPCR 反应中荧光信号达到设定阈值时对应的循环数 (一般 Ct 值在 20-30 之间)。扩增曲线 (Amplification curve) 是指随 PCR 反应进行，根据荧光信号强度随着循环数变化而绘制的曲线。正常的扩增曲线 (S 型) 包括四个阶段：基线期、指数增长期、线性增长期、平台期。熔...
实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR, qPCR）实时荧光定量PCR，即第二代PCR，在聚合酶链反应“变性一退火一延伸”扩增过程的“延伸”段，对荧光探针标记的靶基因荧光信号进行实时采集，通过3个参数(荧光信号-Ct值-靶基因的起始浓度)间的关系，最终确定靶基因的拷贝数或基因的表达水平。但由于其绝对定量分析...