首先计算技术重复的平均值,一般采用算术平均数,(CT1+CT2+CT3)/3,如若重复性不好,可考虑增加样本量。在合适的情况下,技术重复的重复性不是很好时(如差值介于0.3~0.5),可考虑对技术重复采用几何平均数,\sqrt[3]{(CT1+CT2+CT3)}。 2、计算ΔCT(消去内参干扰) 获得各技术重复的均值后,简化表格,计算ΔCT(...
🔄RT-qPCR,即逆转录实时定量聚合酶链式反应,是一种将逆转录反应与实时荧光定量聚合酶链式反应相结合的分子生物学技术。📌技术原理:RT-qPCR以RNA为起始材料,在逆转录阶段,利用逆转录酶将RNA模板转化为互补的DNA链(cDNA)。🌟技术特点: 高灵敏度:能够检测到微量的RNA分子,适用于低丰度基因的表达分析。 高特异性...
定义:RT-qPCR是逆转录实时定量聚合酶链反应(Real-Time Quantitative Reverse Transcription PCR),结合了逆转录PCR和实时定量PCR技术,可用于对RNA分子进行定量分析。首先通过反转录酶将RNA转录为cDNA,然后利用qPCR技术对cDNA进行定量分析。 应用...
SYBR Green I 染料 与双链 DNA 结合,荧光信号强度与双链 DNA 数量相关。 实验前准备 试剂与耗材: 特异性 PCR 引物 总RNA Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit LightCycler® 480SYBR Green I Master 仪器: LightCycler® 480 实时定量 PCR 仪 96 或 384 多孔板等 2.实验操作流程 反转录反应 Q-...
RT-qPCR技术详解：实验设计与优化全攻略 RT-qPCR，即逆转录定量PCR，是一种在分子生物学领域表现出色的技术。它通过将RNA高效地转化为cDNA，并利用实时定量PCR进行扩增和精确分析，展现了卓越的灵敏度和准确性。这一技术不仅广泛应用于基因表达研究、病原体筛查，还涉及基因突变检测等多个方面，成为现代生物学研究的...
实际上， qPCR和Real-time-PCR是同一种技术，即实时定量PCR。这种技术独特之处在于，PCR过程中的每个循环都会实时记录数据，从而实现对起始模板数量的精确分析。尽管Real-time PCR（实时荧光定量PCR）和Reverse transcription PCR（反转录PCR）的缩写都是RT-PCR，但根据国际惯例， RT-PCR特指后者，而Real-time ...
RT-qPCR技术的全称是反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(Reverse Transcription Real-Time Quantitative Polymerase Chain Reaction)。其原理主要可以分为两个步骤来解释: 反转录(Reverse Transcription): 在这一步中,以RNA为模板,在反转录酶的作用下,合成出与RNA互补的DNA(cDNA)。这一步骤是RT-qPCR特有的,用于将RNA信...
Real-time RT-PCR是qPCR和RT-PCR的组合,其中的“RT”是Reverse tranion(逆转录)的意思,所以RT-qPCR就是结合了荧光定量技术的逆转录PCR,即以mRNA或总RNA为模板,先反转录得到cDNA,再以cDNA为模板,通过荧光定量PCR进行定量检测分析。因为RT-PCR只可以定性,但不能进行定量分析。
按照PCR技术的演进,习惯将PCR技术划分为三代:普通PCR技术、实时荧光定量PCR技术(qPCR)以及数字PCR技术(dPCR)。 (1)普通PCR技术 普通PCR即第一代PCR技术,以双链DNA为模板,以dNTP为底物进行扩增,特异性地扩增双链DNA的过程,然后采用琼脂糖凝胶电泳对产物进行定性分析。
回想我刚进入实验室的时候就接触到了荧光定量PCR,作为一个刚毕业的小白,面对一堆名词,哑巴吃黄连,有苦说不出,一头雾水。扩增曲线、标准曲线、域值、CT值、熔解曲线、基线到底都是什么意思?那些荧光图色彩斑斓的很漂亮但是我好像不认识它? 吾日三省吾身,定量实验做对照了吗?今天就带大家一起学习一下基本概念、...