我也做得RT-PCR,是提取某物种中未测序的一段基因.是用近缘物种基因进行比对,得到保守序列设计引物,再提取总RNA,RT-PCR得到目的基因的片段 分析总结。 是用近缘物种基因进行比对得到保守序列设计引物再提取总rnartpcr得到目的基因的片段结果一 题目 做RT-PCR设计引物时,找引物序列有哪些好方法? 答案 我也做得RT...
RT-PCR引物序列 基因来源 引物序列 产物大小(kb) β-actin 人 有意义链CCTCG CCTTT GCCGA TCC 反义链GGATC TTCAT GAGGT AGTCA GTC 0.62 kb β-actin* 大鼠 有意义链TACAA CCTCC TTGCA GCTCC 反义链GGATC TTCAT GAGGT AGTCA GTC 0.62kb β-actin 小鼠 有意义链GTCGT ACCAC AGGCA TTGTG ATGG反义...
RT-PCR中引物的选择指南
你可能会问,怎么能保证,正好是目标DNA在大量进行复制呢?这里面起主要功能的就是这个DNA引物了。 DNA引物是根据目标DNA进行设计的,也就是它的一段序列是正好可以和目标DNA进行结合。所以,引物设计前,是需要知道病毒反转录的DNA序列。病毒的序列还有其可用的引物序列其实在很多公开文献中也都有报道了。 那如何识别目标...
1、.RT-PCR常用引物序列RT-PCR引物序列 基因来源 引物序列 产物大小(kb) -actin 人 有意义链CCTCG CCTTT GCCGA TCC 反义链GGATC TTCAT GAGGT AGTCA GTC 0.62 kb-actin* 大鼠 有意义链TACAA CCTCC TTGCA GCTCC 反义链GGATC TTCAT GAGGT AGTCA GTC 0.62kb -actin 小鼠 有意义链GTCGT ACCAC AGGCA...
1.上下游引物要保守: 为了能够扩增出所需要的保守片段,必须对保守的100-200片段进行pcr扩增。所以引物的选取也要非常的保守,最好不要有不同的碱基,若不得不有时,也必须保证引物的3’端至少有4个碱基是完全保守才可。 在设计保守引物时,要在发表序列上分别找保守一致的区域,即在发表序列的5’端引物位置找的是...
尽管大多数RT-PCR试剂盒使用的引物针对的是病毒RNA的区域,似乎没有什么变化,但病毒RNA序列的变异或突变可能通过阻止引物的正确结合而导致假阴性结果。 而且不是所有的SARS-CoV-2 RT-PCR检测试剂盒都是一样的,有些比其他的更灵敏。 但归根结底,任何RT-PCR检测都是与放入的样品一样好。
基因特异性引物(GSP) 与目的序列互补,是反义寡核苷酸,适用于目的序列已知的情况。如果目的RNA有二级结构,为避免二级结构阻碍引物 结合,应该设计一对以上的引物。建议浓度1 pmol/20 μl体系。 逆转录酶 逆转录酶具有催化RNA反转录成cDNA的聚合酶活性, 同时具有RNase H活性。RNas...
引物序列、 特异性的荧光DNA探针(带荧光的一段特异性的新冠病毒的核酸序列,这个是最关键的,如果特异性不强或者是病毒在这一段发生变异,则很可能会判定为阴性,影响结果)等。 目前采用RT-PCR技术(逆转录荧光PCR技术)。 (1)先从样本中提取RNA,RNA中可能...
。 RT-PCR常用引物序列 RT-PCR引物序列 基因来源 引物序列 产物大小( kb)β-actin 人 有意义链 CCTCG CCTTT GCCGA TCC反义链 GGATC TTCAT GAGGT AGTCA GTC 0.62 kb β-actin* 大鼠 有意义链 TACAACCTCCTTGCAGCTCC反义链 GGATCTTCATGAGGTAGTCAGTC0.62kb β-actin 小鼠 有意义链 GTCGTACCACAGGCATTGTG...