RT-PCR 引物的选择 随机引物 适用于长的或具有发卡结构的 RNA。适用于 rRNA、mRNA、tRNA 等所有 RNA 的反转录反应。主要用于单一模板的 RT-PCR 反应。 Oligo dT 适用于具有 PolyA 尾巴的 RNA。(原核生物的 RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA 和 tRNA 不具PolyA 尾巴。)由于 Ol...
依据RT-PCR,理想的状态下是选择具有较高热稳定性的反转录酶,cDNA的合成才能在较高的温度下进行,确保成功转录具有较高二级结构的RNA,并确保在整个反应过程中的全部活性,从而得到质量更高的cDNA。 RT-PCR引物的选择 逆转录引物一般包含3种:oligo dT引物,随机引物和特异性...
百度试题 题目RT-PCR的引物有哪些?相关知识点: 试题来源: 解析 随机引物Oligo dT基因特异性引物 反馈 收藏
根据引物设计原则选择最佳引物序列,示例中的最佳引物序列为Primer pair 3,把引物复制下来即可。 二、用PrimerBank在线设计qPCR(实时定量PCR)引物,太简单了! PrimerBank是哈佛大学建立的PCR引物的公共资源,这些引物设计被用于基因表达检测或实时定量PCR(qPCR)。PrimerBank包含超过306800个引物,覆盖了大多数已知的人类和小鼠...
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。合成cDNA引物的选择是分子生物学实验中的一项关键步骤，它直接...
RT-PCR中引物的选择指南
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。 合成cDNA引物的选择: 1. 随机六聚体引物:...
在进行RT-PCR实验之前,你需要准备以下试剂:0.1% DEPC 溶液、Trizol、氯仿、异丙醇、DEPC 水配制的75%乙醇、无 RNase-free 的纯水、反转录试剂盒、dNTP mix、Taq 酶、buffer 和凝胶电泳缓冲液等。🧬 仪器和耗材 你需要以下仪器和耗材:Thermo Scientific 全波长扫描式多功能读数仪、Thermo Scientific Arktik PCR 仪...
逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)是一种结合了逆转录PCR和实时荧光定量PCR的技术,可以对RNA分子进行定量分析。RT-qPCR先通过反转录酶将RNA逆转录成cDNA,然后利用qPCR技术对cDNA进行定量分析。RT-qPCR技术广泛应用于RNA表达水平的研究,如基因表达分析、病毒载量检测等。 RNA的荧光定量PCR引物要求与普通qPCR相同,...
二聚提的出现; 其次还可能是 PCR 体系及反应条件的问题, 如果 PCR 体系中引物、 镁离子以及酶浓度过高等, 都容易产生二聚体, 这时要适当降低浓度, 比如 20uLPCR 体系中, 一般 10pmol/ul 的引物, 加 0. 2ul 就可以了 ; 还有可能是退火温度的问题, 可以做个梯度PCR 或降落 PCR, 来摸索一个合适的退火...