二、用PrimerBank在线设计qPCR(实时定量PCR)引物,太简单了! PrimerBank是哈佛大学建立的PCR引物的公共资源,这些引物设计被用于基因表达检测或实时定量PCR(qPCR)。PrimerBank包含超过306800个引物,覆盖了大多数已知的人类和小鼠基因,小鼠引物的所有实验验证数据均可从PrimerBank获得。 特点: 以human p53为例用PrimerBank进...
Primer Premier的主要功能分四大块,其中有三种功能比较常用,即引物设计(Primer),限制酶切点分析(Enzyme),基元查找(Motif)。 (5)点击Primer,进行一下参数设置。 (6)点击Edit Primers 对该引物进行编辑,上游引物从3’端进行碱基的删除调整,下游引物也从3’端进行碱基的删除调整,尽量不出现红色found为宜。 (7)最后...
①一步法RT-PCR使用基因特异性引物,对模板RNA质量要求较高,RNA质量的优劣严重影响逆转录效率。 ②两步法RT-PCR的RT过程使用Oligo dT和Random Primer最适比例混合液作为引物,就反转录产量和效率而言,一步法RT-PCR使用的基因特异性引物低于Oligo dT和Random Primer。 ③Reverse Tranase最适酶活温度多为37-50℃,而...
若不配制 Master Mix,向步骤 1 的反应液中添加试剂时,要先加入 RNase Free dH2O 和5×PrimeScript Buffer 2 (for Real Time)混合均匀,以使 gDNA Eraser 的活性充分受到抑制, 再添加 RT Primer Mix、PrimeScript RT Enzyme Mix I,轻轻混匀进行反转录反应。 使用RT Primer Mix 可以高效合成 cDNA。因为实验目的...
实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)指的是在PCR进行的同时,对其过程进行监测的能力(即实时)。因此,数据可在PCR扩增过程中,而非PCR结束之后,进行收集。这为基于PCR的DNA和RNA定量方法带来了革命性的变革。在实时荧光定量PCR (qPCR)中,反应以循环中首次检测到目标扩增的时间点为特征,而非在一定循环数后...
引物设计三剑客!引物设计最推荐用Primer Premier搭配Oligo !(含安装包以及教程) 额外分享:有需要的小伙伴可以自行下载~ 免费,亲测安装!56个科研人必装软件安装包 (11月更新) 实验数据/图片处理+文献管理+科研绘图+写作翻译+统计分析+办公常用 链接:https://pan.baidu.com/s/1JkjM67dHoKsY3K5AkLGrTg?pwd=6868...
The primers and the kit for detecting high-pathopoiesia porcine reproductive andrespiratory syndrome and classic porcine reproductive andrespiratory syndrome have the advantages of high sensibility, strong specificity, rapidness and convenience, low detecting cost and the like.熊毅...
这里我们要讲的是逆转录RT-PCR技术。 逆转录RT-PCR原理 什么是逆转录RT-PCR技术? RT- PCR,英文名为 Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,即逆转录PCR,是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。这项技术使用的逆转录酶来自逆转录病毒,是一种能按照碱基互补配对原则,以脱氧核糖...
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RT-PCR的工作原理非常简单，它包括三个主要步骤：逆转录、PCR扩增和荧光检测。首先，通过逆转录酶（Reverse Transcriptase）的作用，将RNA逆转录成其对应的cDNA（复制的DNA）。这一步允许我们将RNA样本转化为DNA，从而方便后续的PCR扩增分析。接下来，将逆转录后得到的cDNA用作PCR的模板。通过加入特定的引物（primers）...