解析 说明没扩出来呗 建议 1.增加actin等参照管做对照.actin表达比较保守且表达量高,均可以扩出来.如果扩不出来说明你RNA有问题,重新抽提 2.如果参照没问题,和你的引物分别一起扩,配一样的体系,如果你的引物还扩不出来,换用好点的酶试下 3.如果还出不来,重新设计引物吧...
在考虑调整退火温度。 Q3:PCR结果跑电泳,actin有,但跑不出目的条带,有几种原因?与cDNA的量少有关吗?Mg离子太多是否会抑制Taqase的活性? A3:在所有RNA实验中,最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶(RNA酶)的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定,一般反应不需要辅助因子。因此,RNA抑制剂...
actin是一种肌动蛋白，由于在各个组织细胞的都有表达且表达量差异不大，通常作为内参来使用。如果你用β-actin做RT-PCR也效果不理想的话，那么说明你的cDNA有问题，需要重新进行反转录了。
内参基因一步法RT-PCR两步法RT-PCR通过一步法RT-PCR和两步法RT- PCR扩增裸大麦内参基因β- actin,都得到500bp的目的片段.结果表明,一步法RT - PCR和两步法RT - PCR都能快速检测出目的基因,一步法比较简便,快速,污染少,但是有明显的引物二聚体形成,对后续的荧光定量试验不利;两步法灵敏度更高而且比较经济,...
需要Maker的，不然你不知道你扩出来的条带是不是你需要的。另外内参（actin 是在生物发育的每个阶段都会表达，应该就是一个管家基因靶，所以可以拿出来当内参的）也是需要的，这样可以对你跑出来的目的基因和内参做一下比较，做一下半定量。
actin是指内参基因，用于校正作用，不知道你指的配平是什么意思？
最终的循环数可以反应你的这群T细胞正在被多少个HIV侵染.\x0d相对定量常用于检测实时的转录谱,例如在给药前后,某重要基因转录的实时变化,可以分别收取给药前后的全RNA,用相对转录量不变的基因为内参,如GAPDH或beta-actin,与目标基因转录的转录量对比,来定量反应药物对目的基因转录含量的影响.一气呵成,难免有错,...
1.普通 PCR 2.实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR, qPCR）3.数字PCR（Digital PCR, Dig-...
这里,我们可以知道内参的作用,即通过测量内参,可以在后面分析过程中将不同样品的起始量均一化.内参需要选择在不同样品中有稳定表达量的基因,这就是为什么内参经常选择看家基因的原因.以小鼠为例,常用的内参有actin gapdh hprt等等. 当然,现在的很多观点认为这些基因在不同组织中丰度也不同,例如gapdh,在线粒体含量高...
3.内参的设定:主要为了用于靶 RNA 的定量。常用的内参有 G3PD(甘油醛-3-磷酸脱氢 酶)、β-Actin(β-肌动蛋白)等。其目的在于避免 RNA 定量误差、加样误差以及各 PCR 反应体系中扩增效率不均一各孔间的温度差等所造成的误差。 4. PCR 不能进入平台期,出现平台效应与所扩增的目的基因的长度、序列、二级结...