RT-PCR的模板是RNA，产物是cDNA。RT-PCR过程：通过逆转录（RT）合成第一链cDNA，然后通过聚合酶链式反...
不要在高于 37℃ 时使用 M-MLV。如果不需要全长 cDNA,在第一链反应中使用随机引物。 引物或模板对残余的 RNA 模板敏感 在PCR 前用 RNaseH 处理。靶序列在分析的组织中不表达 尝试其他靶序列或组织。PCR 没有起作用 对两步法 RT-PCR,不要在 PCR 步骤中使用超过 1/5...
7.预变性5min足够了,循环中的变性以你的产物长度来说30s也够了,不过不放心可以改啊,条件是摸索出来的嘛. 最后总结:我觉得引物第一,模板第二,其他神马的只要按PCR的规则随便都可以做出来,做得好不好看而已,你有没有考虑过模板物种问题?是不是没混匀?机器问题?上样问题?试剂存放时间问题,我觉得做不出来要细心...
PCR琼脂糖凝胶分析中RT-PCR产物不理想看到少量或没有RT-PCR产物。可能原因：1．PCR引物设计较差 建议解决方法：避免在引物3'端含有互补序列。避免可以形成内部发卡结构的序列。设计Tm类似的引物。想了解更多精彩内容，快来关注PCR检测试剂盒博湖 2．DNA含有抑制剂 建议解决方法：诸如DMSO，SDS和甲酰胺之类的试剂会抑制...
总体来说,RT-PCR没有产物通常是由多种因素共同导致的。想要成功进行RT-PCR,需要从RNA样品的处理、反应条件的优化、引物设计等多方面入手。尽量做到细致入微,从每一个环节排查,才能达到预期的实验结果。 作为科研人员,我们持续为用户提供前沿的实验资讯、设计方法和选品推荐。如果你想获取更多关于PCR及其他领域的实验资...
RT-PCR: 以RT反应产物cDNA分子为模板进行特异性PCR扩增的过程,是检测基因表达最常用的方法。 RT反应试剂 1 引物: Oligo dT 16,寡聚胸甘酸16个,要求mRNA有poly A 尾巴 mRNA 1-4% 2 逆转录酶 : 鼠白血病病毒莫洛尼株 MMLV 、鸟类成髓细胞瘤病毒 AMV 3 RT反应缓冲液:常用5×浓度。 4 底物:即四种dNTP的...
起始RNA量不足也是导致无产物的一大原因。针对<50ng的RNA样品,可尝试在第一链cDNA合成中添加0.1μg到0.5μg的乙酰BSA,提高模板浓度以确保反应顺利进行。 改善RT-PCR结果的关键策略 结合以上的原因分析,以下是提升RT-PCR成功率的核心策略: 优化RNA提取过程:使用高品质的试剂和无菌操作,确保RNA不被降解。
如果是测序结果开始没有问题,后面出现问题,有可能是测序本身的问题,再试试看。如果所有位置都有双革卫级重齐峰,那问题比较倾向于实验本身的问题,还要看你实验目的是什么:如果RT-PCR结果是用来分析基因的表达,那么两种不同片段都被计算在表达了识诗置量上了,因此就彻底没有什么用了,重新开始吧。如果你是想克隆一个...
这种创新技术提高了cMaster RTplusPCR的灵敏度和特异性。使cMaster RTplusPCR试剂盒既能进行一步法,又能进行两步法RT-PCR,而且具有很大的动力学检测范围,能扩增得到的PCR产物长度范围也很大(一步法反应最长可扩增5.3 kb片段;两步法方案最长能扩增12.3 kb 片段)。
如果是测序结果开始没有问题,后面出现问题,有可能是测序本身的问题,再试试看。如果所有位置都有双峰,那问题比较倾向于实验本身的问题,还要看你实验目的是什么:如果RT-PCR结果是用来分析基因的表达,那么两种不同片江术该调措混脸段都被计算在表达量上了,因此就彻底没有什么用了,重新开始吧。如果你是想克论右么的...