7.预变性5min足够了,循环中的变性以你的产物长度来说30s也够了,不过不放心可以改啊,条件是摸索出来的嘛. 最后总结:我觉得引物第一,模板第二,其他神马的只要按PCR的规则随便都可以做出来,做得好不好看而已,你有没有考虑过模板物种问题?是不是没混匀?机器问题?上样问题?试剂存放时间问题,我觉得做不出来要细心...
造成电泳没有条带的原因是多种多样的,1、mRNA提取是不是成功,有没有降解,(可以稍微取一点跑个电泳或测OD值)2、反转录产生cDNA是不是成功的,就是引物的设计是不是合适3、PCR扩增是的温度是不是合适的 结果二 题目 pcr 电泳图 什么都没有 我做的是RT-PCR,跑试剂盒的阳平对照之后,电泳图上什么也没有,不知...
RT-PCR产物电泳结果只有引物二聚体,没有目的条带,更换引物了也这样,最近2个月反复做PCR跑电泳一直都是只有引物二聚体没有目的条带,我的PCR条件是这样的模板1ul (浓度100ng)引物上下游各1u
原因很多,可能是提取过程中,RNA降解了,也可能是你的反转录不成功,扩不出来;也有可能是你的循环数太少了
对于极低表达丰度的目标，一轮PCR很有可能得不到产物，这是建议使用NESTED PCR，就是设计2套嵌套的引物，第一轮先用外面的那对，理论上可以得到一个比较大的产物（跑胶不一定能看到），然后稀释PCR产物50倍，再用里面那对引物扩一次，一般可以得到跑胶看得见的产物量。3. 关于引物设计，推荐使用Primer...
说个小窍门：样品作一系列的稀释，然后每份取1ul点到一块凝胶上，稍等片刻吸收后，不要电泳，直接EtBr染色。根据亮度再进行一次细微的稀释调整。
2.请大家帮忙看张PCR电泳结果图，谢谢！(电泳结果图|内参)3.诱变引物是什么啊(引物,诱变,基因,反应体系)4.扩增产物大小不对的问题(扩增产物,细胞株,条带)5.三段PCR扩增产物酶切后直接连接，可行吗(酶切,扩增产物,载体)6.荧光定量PCR的扩增产物长度为何不能太长(扩增产物,荧光定量)7.求RealTime ...
建议解决方法:使用扩增级 DNaseⅠ处理 RNA。使用没有逆转录的对照反应检测 DNA 污染。 Q4:PCR 特异性:在琼脂糖凝胶分析中观察到非预期条带,点击查看 Q5:PCR 忠实性:PCR 在产物序列中引入了错误 可能原因: 1)聚合酶忠实性低 建议解决方法:使用带有校正活性的热稳定聚合酶,如 Platinum Pfx DNA 聚合酶。
解答一 举报 根据我的经验来说,产物为200 bp,若有一个与之相差24 bp的片段经过普通琼脂糖电泳是无法区分的,即使使用2%的琼脂糖凝胶. 解析看不懂?免费查看同类题视频解析查看解答 相似问题 如何通过琼脂糖凝胶电泳分开两个大小只差50bp左右的片段? 聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳的异同? 如何做好琼脂糖凝胶...
3、微流体毛细管电泳系统(分析 RNA 浓度和完整性) 目前已经有成熟并广泛应用的生物分析仪,如 Agilent 2100、Experion™ 自动电泳工作站等。 此外还可以采用 3`:5` assay(检测提取产物中 GAPDH mRNA 的完整性来代表所有 RNA 的完整性,分析 RNA 完整性)、SPUD assay (分析 PCR 抑制剂)、NRT PCR assay(分析 ...