RT-PCR的模板是RNA，产物是cDNA。RT-PCR过程：通过逆转录（RT）合成第一链cDNA，然后通过聚合酶链式反...
实时PCR(RT-PCR)是一种使用荧光染料或探针(实验室通常称为引物)技术对样品中存在的核酸进行定量的技术或实现靶基因/序列的扩增。RT-PCR足以扩增目标或模板DNA (cDNA是其中一种),也就是说,它可以在PCR仪器(热循环仪器)复制DNA。它使我们能够研究目标序列或基因,因此一直是遗传学中的一项关键技术。 (图3 RT-PCR...
RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录，要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质。常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞病毒（avian myeloblastosis virus，AMV）反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒（moloney murine leukemia virus，MMLV）反转录酶。在完成逆转录过程之后，通过PCR进行定量分析的时候，随着技术的...
1. 普通 PCR 普通PCR即一代PCR，使用普通PCR扩增仪扩增靶基因，并通过琼脂糖凝胶电泳对产物进行定性分析。2. 实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR, qPCR）实时荧光定量PCR，也叫Real-Time PCR，即二代PCR，是指在PCR扩增反应体系中加入荧光染料或者荧光基团，在整个PCR过程中通过收集荧光信号实时监测每一个...
cDNA 的合成首先在逆转录缓冲液中进行,然后取出1/10的反应产物进行 PCR。 而一步法RT-PCR 具有其它优点(表2), cDNA 合成和扩增反应在同一管中进行, 不需要打开管盖和转移, 有助于减少污染。还可以得到更高的灵敏度, 最低可以达到0.1pg 总RNA,因为整个cDNA样品都被扩增。对于成功的一步法RT-PCR, 一般使用...
总体来说,RT-PCR没有产物通常是由多种因素共同导致的。想要成功进行RT-PCR,需要从RNA样品的处理、反应条件的优化、引物设计等多方面入手。尽量做到细致入微,从每一个环节排查,才能达到预期的实验结果。 作为科研人员,我们持续为用户提供前沿的实验资讯、设计方法和选品推荐。如果你想获取更多关于PCR及其他领域的实验资...
RT-PCR常见问题 (一)RT-PCR灵敏度:在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物。 可能原因 解决方案 RNA被降解 在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA。 使用良好的无污染技术分离RNA。 在将组织从动物体取出后立刻处理。 RNA中包含逆转录州响侵买检句茶岩毛席景抑制剂 ...
为了将扩增的cDNA同沾染的基因组DNA扩增产物分开,可以设计分别同分开的外显子退火的引物。来源于cDNA的PCR产物会比来源于沾染的基因组DNA 的产物短。另外对每个RNA模板进行一个无逆转录的对照实验,以确定一个给定片段是来自基因组DNA还是cDNA。在无逆转录时所...
1.了解用逆转录PCR法获取目的基因的原理。 2.学习和掌握逆转录PCR的技术和方法。 【实验原理】 聚合酶链式反应(PCR)过程利用模板变性,引物退火和引物延伸的多个循环来扩增DNA序列。因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板,是一个指数增长的过程,使其成为检测核酸和克隆基因的一种非常灵敏的技术。一般经25-35...