RT-PCR的工作原理非常简单，它包括三个主要步骤：逆转录、PCR扩增和荧光检测。首先，通过逆转录酶（Reverse Transcriptase）的作用，将RNA逆转录成其对应的cDNA（复制的DNA）。这一步允许我们将RNA样本转化为DNA，从而方便后续的PCR扩增分析。接下来，将逆转录后得到的cDNA用作PCR的模板。通过加入特定的引物（primers）...
(5)点击Primer,进行一下参数设置。 (6)点击Edit Primers 对该引物进行编辑,上游引物从3’端进行碱基的删除调整,下游引物也从3’端进行碱基的删除调整,尽量不出现红色found为宜。 (7)最后将选定的引物在NCBI进行特异性BLAST,再进行合成。 二、实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR) 实时荧光定量PCR...
PCR反应体系主要包含以下五种成分：模板（template)、引物（primers)、底物(dNTP)、DNA聚合酶、PCR缓冲液...
RT-PCR提取的RNA主要是rRNA,即核糖体RNA,但很少有人用它做些什么,倒是含量较少的mRNA,即信使RNA是中心法则所述的遗传信息表现的中转站,所以我们要把微量的信使RNA弄出来,更重要的是,RNA太容易分解了,环境中无处不在的RNA酶,以及其容易被水解的特点啊,我们不得不尽快把珍贵的信使RNA转化成稳定的形式,于是就有...
Real Time PCR Primer Sets (https://www.realtimeprimers.org) 如果没有合适的或者已经证实的可以提供参考,以下的设计方案仅供参考: A.最广泛使用的商业化的软件Beacon Designer(https://www.premierbiosoft.com) B.DIY 的软件Primer Express C.如果Beacon Designer 无法得到您说需要的结果,或者获得到设计方案的...
1. PCR仪 2. PCR管 3. 微量移液器 【操作方法】 一、逆转录 1)逆转录RT反应体系构成: 2)涡旋混匀,42℃反应1小时,95℃加热5分钟,然后置于冰上。 二、PCR扩增 1) PCR反应体系构成 2)将上述反应体系涡旋混匀, 按下列程序运行循环 Step2-4运行30个循环,其中复性温度主要依据引物的不同而不同。
在反转录反应中,TB Green qPCR 法的 RT Primer Mix 用量为 1 μl, 探针 qPCR分析法的用量为 4 μl。 得到的 RT 反应液加入到下一步的 Real Time PCR 反应体系中,其加入量不要超过Real Time PCR 反应体积的 1/10(V/V)量。 Real Time PCR : ...
含Platinum ™ Taq DNA 聚合酶的 SuperScript™ III 一步法 RT-PCR 系统设计用于通过 RT-PCR 对 RNA 分子进行灵敏、可重现的终点检测和分析。使用该便利的一步法配方,您可使用基因特异性引物和来自总 RNA 或 mRNA 的靶标 RNA 在单管中进行 cDNA 合成和 PCR 扩增。该系统使用含 SuperScript™ III 型反...
Primers for RT-PCR performance.Shixiu WeiZhenhui LuYunfeng ZouXiao LinCuiwu LinBuming LiuLi ZhengJinmin Zhao
RT-qPCR是通过检测反应体系中的荧光强度来检测PCR扩增产物的，其荧光标记方法分为两种：荧光染料嵌合法和荧光探针法。1.荧光染料嵌合法 荧光染料嵌合法即应用一种带有荧光的、非特异的DNA结合染料检测PCR过程中积累的扩增产物。常用SYBR Green I染料，该染料在游离状态下几乎不会产生荧光，可以非特异地结合在双链DNA的...