实时定量反转录聚合酶链式反应(Real-Time Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chn Reaction,简称实时定量RT-PCR)是一种在DNA扩增过程中,通过荧光信号实时监测反应产物量的变化,从而得到起始模板量的分析方法。这种技术结合了反转录(RT)和聚合酶链式反应(PCR)两个过程,使得RNA模板也能进行定量分析。 实时定量RT...
第二,在同一试管中通过多重实验共同扩增管家基因,或在单独的实验中扩增。 简而言之,这就是实时 PCR。
实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR),是指在PCR反应体系中加入荧光标记物,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过扩增曲线对未知模板进行定量分析的方法。一般用于mRNA转录水平的定量研究、不同样本或基因组中DNA拷贝数的测定、基因芯片结果验证、药效分析等。 载基采用SYBR荧光染料法进行荧光定量PCR检测,...
real-time qPCR不需要常规PCR的三步法(变性、退火、延伸)。 由于产物长度短(80-150 bp),通常只需要变性和退火步骤。 使用SYBR Green等染料时,PCR后应加溶解程序以形成溶解曲线,判断特异性扩增。 📊 数据分析:通过扩增曲线和融解曲线分析,可进行相对定量或绝对定量分析。相对定量用于比较靶基因在不同样本中的表达...
实时荧光定量PCR，也叫Real-Time PCR，即二代PCR，是指在PCR扩增反应体系中加入荧光染料或者荧光基团，在整个PCR过程中通过收集荧光信号实时监测每一个循环中扩增产物量的变化，最后通过标准曲线和CT值对待测样品进行定量分析。qPCR常用的有两种方法：SYBR Green法和TaqMan探针法。① 荧光染料法（SYBR Green）：SYBR ...
一. RT-qPCR 基本原理和概念实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,通过收集荧光信号,对 PCR进程进行实时...
方法一:2-△△CT(Livak)方法 条件:目标基因和参照基因扩增效率都接近100%且相互间效率偏差在5%以内。使用这个方法之前,必须检验目标基因和参照基因的扩增效率。 首先,对所有的测试样本和校准样本,用内参基因的CT值归一目标基因的CT值: △CT(test)=CT(target,test)- CT(reference,test) △CT(calibrator)=CT(targ...
RT-qPCR是一种对特定DNA进行定量分析的方法，其原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行荧光定量PCR，在PCR扩增过程中，通过收集荧光信号，对PCR进程进行实时检测。在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性...