荧光定量RT-PCR法是基于实时荧光PCR技术的一种分子生物学方法,可以在PCR反应过程中实时检测靶基因的扩增情况。并且,该技术还可以量化靶基因的表达水平并计算出扩增产物的相对丰度,常用于研究基因表达的差异、病原微生物检测和药物研究等领域。 荧光定量RT-PCR法的基本原理是将DNA模板、引物和荧光探针等反应物混合,通过...
【实验】普通PCR、荧光定量RT-qPCR、数字PCR的基本原理和操作方法,注意事项 19:05 【实验】原核表达系统设计全流程,大肠杆菌BL21(DE3),Rosetta,酵母,融合蛋白,诱导,信号肽,分泌类型,包涵体,启动子,标签选择位置,质粒 49:10 【实验】原核表达蛋白纯化操作原理,大肠杆菌,细胞破碎,蛋白标签,亲和层析, 33:00 报告...
PCR 扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR 扩增时,Taq 酶的 5'-3’ 外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每...
TaqMan方法通过采用荧光探针在PCR循环过程中随着特定PCR产物的累计而对其进行检测。 使用TaqMan方法的检测类型 TaqMan方法可用于以下检测类型: 定量,包括: 用于RNA定量的一步法RT-PCR 用于RNA定量的两步法RT-PCR DNA/cDNA定量 等位基因检测 通过IPC进行的正负检测 SYBR Green ...
图1.荧光定量PCR检测方法 第二种方法使用荧光团标记的序列特异性 DNA 探针。 多种化学物质用于检测。 最流行的类型使用 Taq 聚合酶的 5'-3' 核酸外切酶活性来分解寡核苷酸，该寡核苷酸分别在 5'- 和 3'- 末端具有荧光团和猝灭剂。 聚合酶的核酸外切酶活性有助于将荧光团与猝灭剂分离，从而增加荧光。 但是，...
一、实时荧光定量 PCR 概述 RT-QPCR 是 Q-PCR 的一种,应用广泛,包括: 扩增特异性分析 基因定量分析 基因分型 SNP 分析 常用方法: SYBR Green I 非特异性方法 Taqman 水解探针特异性方法 二、SYBR Green I 非特异性方法 SYBR Green I 染料 与双链 DNA 结合,荧光信号强度与双链 DNA数量相关。
一. RT-qPCR 基本原理和概念实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,通过收集荧光信号,对 PCR进程进行实时...