通过 PCR 反应生成双链 DNA,TB Green 与双链 DNA 结合发出荧光,通过检测PCR 反应液中的荧光信号强度,可以对目的基因进行准确定量,同时还可以测定扩增的目的 DNA 片段的融解温度。 反应体系的配制和PCR仪还有关系,不同的PCR仪,配制PCR 反应液可能不同,具体参照试剂的说明书和按照不同仪器的操作手册提供的方法操作。
TaqMan方法通过采用荧光探针在PCR循环过程中随着特定PCR产物的累计而对其进行检测。 使用TaqMan方法的检测类型 TaqMan方法可用于以下检测类型: 定量,包括: 用于RNA定量的一步法RT-PCR 用于RNA定量的两步法RT-PCR DNA/cDNA定量 等位基因检测 通过IPC进行的正负检测 ...
图1.荧光定量PCR检测方法 第二种方法使用荧光团标记的序列特异性 DNA 探针。 多种化学物质用于检测。 最流行的类型使用 Taq 聚合酶的 5'-3' 核酸外切酶活性来分解寡核苷酸，该寡核苷酸分别在 5'- 和 3'- 末端具有荧光团和猝灭剂。 聚合酶的核酸外切酶活性有助于将荧光团与猝灭剂分离，从而增加荧光。 但是，...
通过在PCR反应体系中加入荧光染料(SYBR Green)或荧光标记的特异性的探针,与DNA产物特异性结合,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,最终通过相对定量或荧光定量的方法确定各个样本的本底表达量。可以用于检测mRNA、lncRNA、miRNA、circRNA的基因表达水平。
,是指在PCR反应体系中加入荧光标记物,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过扩增曲线对未知模板进行定量分析的方法。一般用于mRNA转录水平的定量研究、不同样本或基因组中DNA拷贝数的测定、基因芯片结果验证、药效分析等。 载基采用SYBR荧光染料法进行荧光定量PCR检测,从引物设计到检测一次性完成,提供2种常用的内...
荧光定量RT-PCR法是基于实时荧光PCR技术的一种分子生物学方法,可以在PCR反应过程中实时检测靶基因的扩增情况。并且,该技术还可以量化靶基因的表达水平并计算出扩增产物的相对丰度,常用于研究基因表达的差异、病原微生物检测和药物研究等领域。 荧光定量RT-PCR法的基本原理是将DNA模板、引物和荧光探针等反应物混合,通过...
一种荧光定量RT-PCR鉴别检测蓝耳病毒株的方法,包括以下步骤:1)采集血样,提取RNA,并设计特异性引物;上游引物的核苷酸序列为:CTTCCGACACCATCCGAG,下游引物的核苷酸序列为:TTGGCAGGTTGGTCACAG;2)以步骤1)所提取的RNA为模板,加入特异性引物,特异性引物的终浓度为0.2μMol/L;用TARAKA试剂盒反转录,用SYBR Green试剂盒...
方法简介 所谓的实时荧光定量PCR 就是通过对PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量PCR 反应中,引入了一种荧光化学物质,随着 PCR 反应的进行,PCR 反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环 ...